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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】HPLC 条件摸索 很苦恼
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青枫林

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】HPLC 条件摸索 很苦恼 已有8人参与

本人药剂专业，目前做毕业课题，摸索含量测定方法，主药和辅料在紫外200-330nm处有吸收，现在只能用HPLC方法。
普通C18柱（150*4.6mm），室温，waters 2487系统，流动相：甲醇-0.5%冰醋酸-乙腈（69:21:10），流速：1ml/min ，波长261nm，此条件下辅料在主药出峰时间前0.2min处有个小峰，辅料和主药一起时，小峰和主峰合并了（就一个峰），干扰主药含量的测定。
目前已经将流动相pH值调到8.0，流速降低了，极性调大了，但是没效果，时间还是差个0.2-0.3min
现在该怎么办呢？
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1楼 2010-10-04 17:26:24
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个长柱子
降低有机相的比例
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2楼2010-10-04 18:35:38
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Top_kingk

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lemonin2008 at 2010-10-04 18:35:38:
换个长柱子
降低有机相的比例

同意
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3楼2010-10-04 21:27:35
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charls

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
再不行可以选择梯度洗脱。
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4楼2010-10-04 21:52:32
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xugengjie

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):多谢指教！ 2010-10-06 00:31:26
你开始选择的流动相是酸性的，为什么后来改为碱性呢，难道你要分的化合物为生物碱，如果微酸性化合物，建议你选择酸性流动相但同时要严格控制酸度其不可超越柱子的容纳极限，你可以降低流动相的强度，即增大流动相的极性！
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Gremangen
5楼2010-10-04 22:20:21
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zlz-zm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意5楼的！我感觉应该是离子抑制色谱吧，就应该选择酸性的流动相，并且降低流动相的强度，来增强保留，使主药和辅料分开。再者就是用梯度
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6楼2010-10-15 08:32:45
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wu-ming

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在水相中不加盐也可以试试，再调下流动相比例
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7楼2012-10-17 15:50:30
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天然的虫

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么不用盐试试呢？比如磷酸盐
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8楼2012-10-17 20:38:20
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betterflower

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应在酸性条件下操作，调节流动相比例试试，或者用梯度洗脱
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9楼2012-10-31 11:22:20
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