10楼: Originally posted by syn1985 at 2011-11-22 19:58:32:
谢谢 讲的还挺详细的 我看文献里面也说重叠的序列flexibility 我想重叠的肯定不能随意编 最起码插入这段序列不能对影响其他基因的编码， 但是因为没有模板  所以我不知道该怎么设计 不知道可不可以以被敲除的基因 ...

11楼: Originally posted by lihegang2000 at 2011-11-23 08:43:08:
你既然是要把某一段序列删除，就不需要插入什么序列了。
实际上你是把两段独立序列拼接起来，overlap PCR引物一般没什么好设计的，目的确定了，引物也就基本上定了

12楼: Originally posted by syn1985 at 2011-11-23 09:13:14:
引物的3'端是定下来了 可是5‘端怎么办啊？引物设计的时候不是需要模板吗 那没有模板怎么设计啊？

6楼: Originally posted by mytkkxx at 2011-11-21 22:55:46
如果它们两个是方向互补的，那引物碱基序列就只有一种可能了，就是两个片段融合的部位，第一个片段最后面20nt加第二个片段最前面20nt，不是随便列一个aggta什么的
可以看下这篇文章Fusion PCR and gene targeting

11楼: Originally posted by lihegang2000 at 2011-11-23 08:43:08
你既然是要把某一段序列删除，就不需要插入什么序列了。
实际上你是把两段独立序列拼接起来，overlap PCR引物一般没什么好设计的，目的确定了，引物也就基本上定了...

17楼: Originally posted by zfj20110603 at 2013-06-07 14:57:44
想问一下你用重叠PCR做过序列删除吗？我要缺失2700bp的片段，用重叠PCR可行吗？...

18楼: Originally posted by lihegang2000 at 2013-06-08 08:14:01
当然可以，实际上你是把两段序列拼接起来，中间的两条引物有20bp左右的互补区域就可以了。...

2楼: Originally posted by mytkkxx at 2011-11-21 18:30:38
前不久做了下，这个不是随便加的，如果要将两个片段融合起来，那么在设计前面片段的反向引物的时候在5'端加上后面片段开始的碱基序列，大概20nt就可以了，同理在后面片段的正向引物5'端加上前面片段20nt左右。也就是 ...