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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物组织GFP绿色荧光观察
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莎莎乐happy

新虫 (小有名气)

[求助] 植物组织GFP绿色荧光观察

我在做启动子功能分析实验，将启动子连GFP，转拟南芥，想分析转基因拟南芥各个组织中GFP发荧光情况，应用哪种仪器检测呀？用普通的荧光显微镜可以吗？还是用激光共聚焦？还是其他？
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1楼 2011-11-14 23:02:47
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
莎莎乐happy(金币+4): 谢谢！给我指了条路。还能再具体点儿吗？ 2011-11-16 22:39:26
西瓜(金币+1): good 2011-11-17 18:38:00
用 共聚焦显微镜 做Z轴断层扫描，然后在计算机里重构3D图像。
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摒气动方息，宁神心自明。
6楼2011-11-16 08:52:28
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
莎莎乐happy(金币+10): 谢谢！ 2011-11-17 16:07:27
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-11-17 18:38:36
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-11-17 18:38:36
引用回帖:
7楼: Originally posted by 莎莎乐happy at 2011-11-16 22:49:38:
想问一下，组织材料需要做处理吗？还是直接就可以观察？

用激光共聚焦的话不需要特别处理样本，不过你的样本厚度有要求，不能太厚，否则激光的穿透性会受影响。如果你的样本厚度超过10um的话就要现做物力切片，石蜡或者冰冻都行。然后再用这个片子上共聚焦。共聚焦在10um范围内做详细的光学CT，也就是我说的Z轴步进扫描。这个只要是共聚焦都能做，扫描结果用共聚焦配套的软件就能整合成3D图像或动态演示。具体操作要看你是哪个型号的共聚焦了，不过大同小异~
共聚焦也能做普通的DIC成像，DIC结果与荧光检测结果merge后就能直观显示哪里有GFP了~
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摒气动方息，宁神心自明。
10楼2011-11-17 09:03:14
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

莎莎乐happy(金币+2): 2011-11-17 16:07:57
引用回帖:
10楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-17 09:03:14:
用激光共聚焦的话不需要特别处理样本，不过你的样本厚度有要求，不能太厚，否则激光的穿透性会受影响。如果你的样本厚度超过10um的话就要现做物力切片，石蜡或者冰冻都行。然后再用这个片子上共聚焦。共聚焦在10 ...

忘了说了，如果想要结果稳定的话，样本可以固定一下，福尔马林固定液就可以~
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11楼2011-11-17 09:04:12
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

莎莎乐happy(金币+5): 2011-12-15 09:59:29
内容已删除
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摒气动方息，宁神心自明。
16楼2011-12-15 09:03:16
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

莎莎乐happy(金币+5): 2011-12-15 09:59:41
引用回帖:
15楼: Originally posted by 莎莎乐happy at 2011-12-12 18:16:22:
你好！打扰了！还想问你个问题，做石蜡切片后，还需要染色不？石蜡包埋的样本直接可以看吗？

石蜡切片后是否染色看你的需要了，如果你是GFP的话当然不用再染任何东西了。如果是做免疫荧光的话你需要再去做抗体和荧光标记识别。

石蜡包埋的样本要先切成石蜡切片，然后在玻片上粘片，脱蜡。如果你不染色的话脱蜡后可以直接封片，如果要染色的话脱蜡后要根据你染色的液体环境做具体操作，比如用抗体做标记的话你需要先复水到水环境然后再用抗体处理，最后再封片。。。

封片后的样品可以直接去观察了，要注意在显微镜设置里选择正确的封片介质折光率。
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摒气动方息，宁神心自明。
17楼2011-12-15 09:06:51
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

莎莎乐happy(金币+3): 2011-12-15 18:26:24
引用回帖:
18楼: Originally posted by 莎莎乐happy at 2011-12-15 10:01:31:
石蜡会不会影响绿色荧光的观察呀？

我不是说了吗，在上镜之前是要脱蜡的。。。。就是说上镜的时候已经没有石蜡存在于样品中了。。。
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fishyr
摒气动方息，宁神心自明。
19楼2011-12-15 16:16:30
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