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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求问：sigma 生物素NHS-Biotin（H1795）谁用过？低浓度连抗体是否连不上？
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chaohu1127

银虫 (小有名气)

[求助] 求问：sigma 生物素NHS-Biotin（H1795）谁用过？低浓度连抗体是否连不上？

各位高手，我用的sigma的H1795货号的生物素连抗体，步骤如下。
低浓度的抗体：用缓冲液配好的0.1mg/ml 纯化过的抗体（超滤过叠氮钠）100ul 和DMF溶解的0.22mg/ml 生物素 5ul 于25度下反应2小时（摇床中），加入4ul 0.01M NH4Cl 温育10min，PBS超滤3次，贮存为0.1mg/ml .
看到一些讨论说连接反应ph 很重要，试过7.4  8.5  9.5三种PH，好像都没反应上。

想问问是不是这种标记反应需要高浓度，像我这种低浓度就不行啦？
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啾啾……
1楼 2011-11-13 22:27:05
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chaohu1127

银虫 (小有名气)
难道大家用的都是pierce的？
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啾啾……
3楼2011-11-15 16:12:59
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lynni

木虫 (正式写手)
我最近用biotin标记蛋白，浓度倒是挺高的，不过比说明书推荐的要低，还是能标记上。
赞一下 回复此楼
淘喜欢的一切
4楼2011-12-26 22:26:42
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