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chaohu1127

银虫 (小有名气)

[求助] 求问:sigma 生物素NHS-Biotin(H1795)谁用过?低浓度连抗体是否连不上?

各位高手,我用的sigma的H1795货号的生物素连抗体,步骤如下。
低浓度的抗体:用缓冲液配好的0.1mg/ml 纯化过的抗体(超滤过叠氮钠)100ul 和DMF溶解的0.22mg/ml 生物素 5ul 于25度下反应2小时(摇床中),加入4ul 0.01M NH4Cl 温育10min,PBS超滤3次,贮存为0.1mg/ml .
看到一些讨论说连接反应ph 很重要,试过7.4  8.5  9.5三种PH,好像都没反应上。

想问问是不是这种标记反应需要高浓度,像我这种低浓度就不行啦?
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啾啾……
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chaohu1127

银虫 (小有名气)

难道大家用的都是pierce的?
啾啾……
3楼2011-11-15 16:12:59
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lynni

木虫 (正式写手)

我最近用biotin标记蛋白,浓度倒是挺高的,不过比说明书推荐的要低,还是能标记上。
淘喜欢的一切
4楼2011-12-26 22:26:42
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