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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR失败
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

[求助] PCR失败

目标片段是900，模板是1200bp左右，做PCR跑出来的胶条带在500bp 和 750bp之间有一条，另外除了模板条带之外，还有一个很亮的2000多的条带，目标条带一点木有，悲剧啊，求可能原因。
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1楼 2011-11-11 21:11:03
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shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-11-11 21:27:30:
模板条带?
1200bp的模板,能看见模板条带, 模板太浓了
有非特异结合以及模板之间的交错结合
我感觉要降低模板浓度,再稀释50倍!

试一下看看，反正这次做已经把退火温度比理论的高4度左右了，不知道还能不能把退火温度提高，最浓的两个条带是500-750之间和2000多的，模板条带还好，很纳闷，怎么会出现这两个条带呢
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3楼2011-11-12 09:15:52
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

shuifen1108(金币+2): 2011-11-14 22:21:02
模板条带?
1200bp的模板,能看见模板条带, 模板太浓了
有非特异结合以及模板之间的交错结合
我感觉要降低模板浓度,再稀释50倍!
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真相是最大的奢侈品
2楼2011-11-11 21:27:30
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 有参考价值! 2011-11-12 09:50:59
shuifen1108(金币+2): 2011-11-14 22:21:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuifen1108 at 2011-11-12 09:15:52:
试一下看看，反正这次做已经把退火温度比理论的高4度左右了，不知道还能不能把退火温度提高，最浓的两个条带是500-750之间和2000多的，模板条带还好，很纳闷，怎么会出现这两个条带呢

我觉得只要引物特异性强，退火温度可以继续提高，曾经见一学长用80℃退火，大胆尝试吧！
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2011-11-12 09:25:44
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shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by imyting at 2011-11-12 09:25:44:
我觉得只要引物特异性强，退火温度可以继续提高，曾经见一学长用80℃退火，大胆尝试吧！

太牛了吧  退火温度这么高  那我再尝试一下把退火温度再提高点吧  3Q
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5楼2011-11-12 10:24:41
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