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jackiehyz

银虫 (小有名气)

[求助] 关于RT-qPCR

请大家帮忙解答一下：
做荧光定量PCR的96孔板用之前需要灭菌吗？
什么是荧光定量PCR的校正液，是用来校正什么的？是购买的吗？或者有什么可以替代的？
谢谢啦！
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一个人如果完全按照自己的内心活着，要么成为一个疯子，要么成就一个传奇
1楼 2011-11-08 22:16:50
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jackiehyz

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-09 12:14:59:
板一般不需要再灭菌了。
校正液我就知道AB公司的ROX，有很多荧光定量PCR的试剂盒都有附送的（如Takara和天根的，其他公司没用过），也有的公司是需要单独买，具体可以问下公司那边。

那每次做实验之前都要用校正液校正一次吗？请问你用过ABI7500的荧光定量PCR仪吗，如果要校正，是怎么处理的？还有溶解曲线的程序是和PCR程序的设置一起的吗？万分感谢你的回答！
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一个人如果完全按照自己的内心活着，要么成为一个疯子，要么成就一个传奇
3楼2011-11-17 23:44:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

板一般不需要再灭菌了。
校正液我就知道AB公司的ROX，有很多荧光定量PCR的试剂盒都有附送的（如Takara和天根的，其他公司没用过），也有的公司是需要单独买，具体可以问下公司那边。
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jackiehyz
2楼2011-11-09 12:14:59
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小小懒猫儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

每次加校正液ROX的时候都是提前混在Mix里的。每次做实验都要加的。关于溶解曲线，是你上96孔板上机之前就设置好的程序，你需要什么要的条件都是提前设好的。软件自动分析数据，溶解曲线也是系统直接算出来的。
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jackiehyz
小小懒猫
4楼2011-11-18 10:07:31
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

jackiehyz(金币+2): 好的，非常感谢你！ 2011-11-18 23:35:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by jackiehyz at 2011-11-17 23:44:56:
那每次做实验之前都要用校正液校正一次吗？请问你用过ABI7500的荧光定量PCR仪吗，如果要校正，是怎么处理的？还有溶解曲线的程序是和PCR程序的设置一起的吗？万分感谢你的回答！

ROX是直接加到PCR反应液里的，每次都要用。设置里面应该有个选项，说明有没有加ROX。融解曲线和PCR是一起设置的，融解曲线分析在PCR结束之后进行。7500没用过呢。
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5楼2011-11-18 10:12:09
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