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jackiehyz

银虫 (小有名气)

[求助] 关于RT-qPCR

请大家帮忙解答一下:
做荧光定量PCR的96孔板用之前需要灭菌吗?
什么是荧光定量PCR的校正液,是用来校正什么的?是购买的吗?或者有什么可以替代的?
谢谢啦!
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

板一般不需要再灭菌了。
校正液我就知道AB公司的ROX,有很多荧光定量PCR的试剂盒都有附送的(如Takara和天根的,其他公司没用过),也有的公司是需要单独买,具体可以问下公司那边。

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2楼2011-11-09 12:14:59
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jackiehyz

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-09 12:14:59:
板一般不需要再灭菌了。
校正液我就知道AB公司的ROX,有很多荧光定量PCR的试剂盒都有附送的(如Takara和天根的,其他公司没用过),也有的公司是需要单独买,具体可以问下公司那边。

那每次做实验之前都要用校正液校正一次吗?请问你用过ABI7500的荧光定量PCR仪吗,如果要校正,是怎么处理的?还有溶解曲线的程序是和PCR程序的设置一起的吗?万分感谢你的回答!
一个人如果完全按照自己的内心活着,要么成为一个疯子,要么成就一个传奇
3楼2011-11-17 23:44:56
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小小懒猫儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

每次加校正液ROX的时候都是提前混在Mix里的。每次做实验都要加的。关于溶解曲线,是你上96孔板上机之前就设置好的程序,你需要什么要的条件都是提前设好的。软件自动分析数据,溶解曲线也是系统直接算出来的。

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小小懒猫
4楼2011-11-18 10:07:31
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

jackiehyz(金币+2): 好的,非常感谢你! 2011-11-18 23:35:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by jackiehyz at 2011-11-17 23:44:56:
那每次做实验之前都要用校正液校正一次吗?请问你用过ABI7500的荧光定量PCR仪吗,如果要校正,是怎么处理的?还有溶解曲线的程序是和PCR程序的设置一起的吗?万分感谢你的回答!

ROX是直接加到PCR反应液里的,每次都要用。设置里面应该有个选项,说明有没有加ROX。融解曲线和PCR是一起设置的,融解曲线分析在PCR结束之后进行。7500没用过呢。
5楼2011-11-18 10:12:09
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jackiehyz

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小懒猫儿 at 2011-11-18 10:07:31:
每次加校正液ROX的时候都是提前混在Mix里的。每次做实验都要加的。关于溶解曲线,是你上96孔板上机之前就设置好的程序,你需要什么要的条件都是提前设好的。软件自动分析数据,溶解曲线也是系统直接算出来的。

非常感谢哦!
一个人如果完全按照自己的内心活着,要么成为一个疯子,要么成就一个传奇
6楼2011-11-18 23:38:14
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