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H-xiangzhu金虫 (正式写手)
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微生物胞内物质与胞外代谢产物提取
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我要提取微生物胞内和胞外代谢产物，要去除杂蛋白质和菌体等，离心沉淀后， 1、上清液我加入草酸沉淀，后面加入丙酮溶解后离心去沉淀，请问丙酮我怎么去除呢？ 2、对于胞内蛋白，我加入无水乙醇超声波破碎，后面离心去除沉淀，可是我的上清液中有无水乙醇，请问用什么方法可以把无水乙醇去除呢？ 补充：1、我试验样品很少，就只有小几ml这样 2、我们实验室只有真空泵，没有旋转蒸发仪和吹氮仪 |
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【答案】应助回帖
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zhang8826857(金币+3): good，看lz的反馈，lz反馈好可以向版主申请个EPI啊^_^ 2011-11-07 14:14:07
H-xiangzhu(金币+1): 2011-11-07 15:23:40
zhang8826857(金币+3): good，看lz的反馈，lz反馈好可以向版主申请个EPI啊^_^ 2011-11-07 14:14:07
H-xiangzhu(金币+1): 2011-11-07 15:23:40
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1.我一般就是放在通风橱几个小时，丙酮很快就挥发完了。剩余的主要是水分溶液。 乙醇的较难挥发，几个小时后放在40摄氏度的抽真空的恒温箱中，大约一个小时可以抽完剩余水分。 2.注意事项！ 这时候要注意，你到底是测什么？！！ 例如你要是测定发酵液的乙酸，肯定是要再抽之前加6M NaOH少许，将溶液变碱。因为在酸性条件下，乙酸在最后快抽干的时候要挥发的! 3.无论是丙酮还是乙醇，除蛋白的效果走不足以立即上液相柱子。其中会有不少的蛋白残留。即使是使用80%以上的乙醇。不信，你可以拿BSA蛋白做下测试，看看跟三氯乙酸相比，能不能有多少蛋白沉淀。 但是，这一步中有一个很好的去处蛋白的方法。就是最后的干燥抽真空步骤。当接近干燥的时候，所有的细胞蛋白都回变性沉淀的！ 就是说，对于干燥抽干的样品，你只要用水溶液溶解，然后10000 rpm离心5-10分钟，上清中就几乎没有蛋白了。 细胞蛋白都回变成一团沉在管子的底部。上清你可以直接上样过柱子。 |
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H-xiangzhu4楼2011-11-07 14:10:46
