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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物胞内物质与胞外代谢产物提取
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

[求助] 微生物胞内物质与胞外代谢产物提取

我要提取微生物胞内和胞外代谢产物，要去除杂蛋白质和菌体等，离心沉淀后，
1、上清液我加入草酸沉淀，后面加入丙酮溶解后离心去沉淀，请问丙酮我怎么去除呢？
2、对于胞内蛋白，我加入无水乙醇超声波破碎，后面离心去除沉淀，可是我的上清液中有无水乙醇，请问用什么方法可以把无水乙醇去除呢？

补充：1、我试验样品很少，就只有小几ml这样
      2、我们实验室只有真空泵，没有旋转蒸发仪和吹氮仪
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共同学习，一起进步
1楼 2011-11-07 12:03:54
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2011-11-07 13:02:19:
放可以带抽真空嘴的干燥器中自然挥发干燥（放烘干的硅胶）或辅助抽真空干燥。

那我怎么判断溶剂是否蒸发完全呢？
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共同学习，一起进步
3楼2011-11-07 13:56:38
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流 2011-11-07 13:07:55
放可以带抽真空嘴的干燥器中自然挥发干燥（放烘干的硅胶）或辅助抽真空干燥。
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为什么
2楼2011-11-07 13:02:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857(金币+3): good，看lz的反馈，lz反馈好可以向版主申请个EPI啊^_^ 2011-11-07 14:14:07
H-xiangzhu(金币+1): 2011-11-07 15:23:40
1.我一般就是放在通风橱几个小时，丙酮很快就挥发完了。剩余的主要是水分溶液。
乙醇的较难挥发，几个小时后放在40摄氏度的抽真空的恒温箱中，大约一个小时可以抽完剩余水分。

2.注意事项！
这时候要注意，你到底是测什么？！！
例如你要是测定发酵液的乙酸，肯定是要再抽之前加6M NaOH少许，将溶液变碱。因为在酸性条件下，乙酸在最后快抽干的时候要挥发的!

3.无论是丙酮还是乙醇，除蛋白的效果走不足以立即上液相柱子。其中会有不少的蛋白残留。即使是使用80%以上的乙醇。不信，你可以拿BSA蛋白做下测试，看看跟三氯乙酸相比，能不能有多少蛋白沉淀。

但是，这一步中有一个很好的去处蛋白的方法。就是最后的干燥抽真空步骤。当接近干燥的时候，所有的细胞蛋白都回变性沉淀的！

就是说，对于干燥抽干的样品，你只要用水溶液溶解，然后10000 rpm离心5-10分钟，上清中就几乎没有蛋白了。

细胞蛋白都回变成一团沉在管子的底部。上清你可以直接上样过柱子。
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H-xiangzhu
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2011-11-07 14:10:46
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★ ★
zhang8826857(金币+2): 鼓励应助 2011-11-11 11:29:53
楼主MM，还有其他的几个小技巧，哥都一块儿告诉你。

1.样品几毫升足够啦。用那种 5mL的EP管，将丙酮或乙醇用抽风机抽去还剩下大约 1ml的时候，里面主要的就是水分啦，再难风干啦。。。这时就换成抽真空恒温箱。

恒温箱可以开到40-50摄氏度，对于小分子的代谢物一般不会变质的。

2.在抽真空的时候，一定要将EP管的盖子完全打开，然后慢慢抽，因为可能会出现爆沸，将你的样品都冲出来。所以这时候你要自己摸索一下抽的条件哈~~
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2011-11-07 14:19:23
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