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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问做液相，设置流动相梯度，以及加酸，加盐 分别是什么作用呢?谢谢
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renruntan

禁虫 (著名写手)
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1楼 2011-11-03 18:03:57
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jiejiewutong

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2011-11-03 20:12:49
renruntan(金币+2): 谢谢 2011-11-03 22:42:43
renruntan(金币+2): 谢谢 2011-11-03 22:42:47
设置流动相是为了个好的分离色谱峰，加酸的话一般式调节pH值，加酸要看你的流动相是什么，比如说是磷酸盐类的流动相，那么久用磷酸调节；加盐我这里一般就是改变流动相的浓度。
乙腈和甲醇的作用是一样的，但是乙腈的洗脱效果会更好
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得之，我幸；失之。我命
2楼2011-11-03 18:53:12
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renruntan

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-11-03 22:43:44
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hanhedong

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
renruntan(金币+5): 谢谢 真的很谢谢 2011-11-05 09:39:52
renruntan: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-06 09:50:35
梯度洗脱一般是确定样品中初成分的出峰情况，从而确定更好的分离条件。
加乙酸或者三乙胺，主要用在硅胶柱的系统中
在硅胶柱的填料键合硅胶上有硅羟基，加乙酸或者三乙胺主要就是抑制硅羟基的作用，防止峰拖尾
被测物质显酸性，则加乙酸
被测物质显碱性，则加三乙胺
甲醇和乙腈的不同：
   1.吸光度：乙腈HPLC吸收最小（特别是在短波长上小）。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外，在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少，虽然，其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样，但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。
2.压力：乙腈低。根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
3.洗脱能力：一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小.
4.分离(洗脱)的选择性.两者的差异：乙腈和甲醇在分离的选择性上不同.由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致.因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看.
5.峰形：用时出现差异.像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈类时拖尾大,用甲醇类可抑制.可是,一般情况下,聚合物类反相柱,与硅胶柱相比,更具有峰形宽的倾向,特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见.这在流动相是甲醇时非常显著,而用乙腈时不明显.为此,用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类),这是因为乙腈使凝胶膨润.
6.流动相的脱气：甲醇与水混合时发热,多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易).而乙腈由于吸热冷却,随着慢慢回到室温,产生气泡,所以要考虑脱气(加温搅拌,过滤膜,He脱气等).
结论：以上反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较.粗略地讲是,使用乙腈HPLC级最好,在选择性,峰形差时试用甲醇HPLC,但根据各种不用性质设计分析条件也是必要的。
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4楼2011-11-04 17:00:15
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黄娜娜
5楼2012-04-05 19:28:18
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

做梯度分析的时候你的试剂纯度和试剂的性质会影响比较大，纯度要高，流动相要不易产生气泡
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6楼2012-06-07 19:26:14
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