应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CTAB 基因提取方法的问题
51/1返回列表
查看: 3222  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

炎黄逍遥

新虫 (初入文坛)

[交流] CTAB 基因提取方法的问题

最近学习提取昆虫基因组（用的是蛴螬），采用CATB法，从文献上找的CTAB提取液配方，如下
0.1M Tris-HCl/ 0.02M EDTA/ 1.4M NaCl/ 0.2% β-巯基乙醇/ 0.05M CTAB
液氮研磨，苯酚氯仿抽提，冷异丙醇沉淀
头一次做使用的 华北大黑鳃金龟和 铜绿丽金龟幼虫，提取效果挺好，做PCR条带也很清晰，可是过了一周之后又做了一次（换做暗黑鳃金龟和黄褐丽金龟幼虫），虽然提取效果也不错，但是PCR却再也P不出东西来了，四种昆虫基因组提取结果如图所示（前两个能PCR出条带，后两个P不出来）。
这个问题是CTAB提取的问题么？PCR应该不会出现问题，引物设计和程序一类都没问题，我觉得问题可能会出现在提取液上面。
CTAB配制完后我一直都是 室温保存，因为放4℃感觉是完全析出。。这个提取液需要现用现配吗？使用之前不温浴溶解对提取影响大吗？确实第二次做的时候没有温浴，因为我看只有少量白色絮状析出，而且研磨之后要65℃水浴1个小时，所以觉得提前温浴没有什么必要吧。。。
各位大侠能看出来这是哪里出现了问题吗？或是有哪位同学以前也出现过这种问题？是如何解决的啊？

从左到右 分别是 大黑，铜绿，暗黑，黄褐  前两个P出了结果，后两个P不出来了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-11-02 15:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suijinkai

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
CTAB很稳定的，《精编分子生物学实验指南》中说2%的CTAB抽提液可以在室温下放置几年，而不影响使用。当然用之前如果有沉淀析出，一定要加热溶解，分子这东西有时候即使过程中做的很严谨也难免不出结果，何况再粗心一下。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-12-15 17:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

rollandyoung

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-11-02 20:58:32
1.我们用ctab提取dna的时候都不会现用现配。个人感觉放置个把月没问题。
2.提前水浴是因为温度较低的情况下ctab会有少量无法溶解，水浴是为了使其溶解。
3.pcr没有结果可以看一下是不是乙醇洗沉淀的时候没有挥发干净，其实有的时候什么步骤都没变就是做不出来，过一段时间又出来了，做分生就是这样，有的时候很难说出原因。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-11-02 19:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)
★ ★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-02 21:27:54
DNA看起来没问题，可以用。你将后面的两个DNA模板稀释50或100倍再PCR试试。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-11-02 19:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)
★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
加RNA酶消化了没？抽提一下试试，看基因组主带应该不会有问题。另外CTAB法提的基因组浓度比较大，可以做个稀释度。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-02 21:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料考研调剂 +27 云木达达 2026-04-11 29/1450 2026-04-12 22:48 by kyle12138
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +9 hualkop 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:41 by kyle12138
[考研] 调剂求收留 +29 果然有我 2026-04-10 30/1500 2026-04-12 22:14 by zxcwyt
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 求助调剂，跨调 +12 X十甫寸Y 2026-04-11 12/600 2026-04-12 10:20 by zhouyuwinner
[考研] 305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-12 07:35 by zhouxiaoyu
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +9 天下ww 2026-04-09 9/450 2026-04-10 22:58 by Ftglcn90
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 085404，285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 368化学求调剂 +13 wwwwabcde 2026-04-07 14/700 2026-04-09 14:47 by heaven_jay
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭