应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CTAB 基因提取方法的问题
51/1返回列表
查看: 3223  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

炎黄逍遥

新虫 (初入文坛)

[交流] CTAB 基因提取方法的问题

最近学习提取昆虫基因组（用的是蛴螬），采用CATB法，从文献上找的CTAB提取液配方，如下
0.1M Tris-HCl/ 0.02M EDTA/ 1.4M NaCl/ 0.2% β-巯基乙醇/ 0.05M CTAB
液氮研磨，苯酚氯仿抽提，冷异丙醇沉淀
头一次做使用的 华北大黑鳃金龟和 铜绿丽金龟幼虫，提取效果挺好，做PCR条带也很清晰，可是过了一周之后又做了一次（换做暗黑鳃金龟和黄褐丽金龟幼虫），虽然提取效果也不错，但是PCR却再也P不出东西来了，四种昆虫基因组提取结果如图所示（前两个能PCR出条带，后两个P不出来）。
这个问题是CTAB提取的问题么？PCR应该不会出现问题，引物设计和程序一类都没问题，我觉得问题可能会出现在提取液上面。
CTAB配制完后我一直都是 室温保存，因为放4℃感觉是完全析出。。这个提取液需要现用现配吗？使用之前不温浴溶解对提取影响大吗？确实第二次做的时候没有温浴，因为我看只有少量白色絮状析出，而且研磨之后要65℃水浴1个小时，所以觉得提前温浴没有什么必要吧。。。
各位大侠能看出来这是哪里出现了问题吗？或是有哪位同学以前也出现过这种问题？是如何解决的啊？

从左到右 分别是 大黑，铜绿，暗黑，黄褐  前两个P出了结果，后两个P不出来了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-11-02 15:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suijinkai

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
CTAB很稳定的，《精编分子生物学实验指南》中说2%的CTAB抽提液可以在室温下放置几年，而不影响使用。当然用之前如果有沉淀析出，一定要加热溶解，分子这东西有时候即使过程中做的很严谨也难免不出结果，何况再粗心一下。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-12-15 17:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

rollandyoung

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-11-02 20:58:32
1.我们用ctab提取dna的时候都不会现用现配。个人感觉放置个把月没问题。
2.提前水浴是因为温度较低的情况下ctab会有少量无法溶解，水浴是为了使其溶解。
3.pcr没有结果可以看一下是不是乙醇洗沉淀的时候没有挥发干净，其实有的时候什么步骤都没变就是做不出来，过一段时间又出来了，做分生就是这样，有的时候很难说出原因。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-11-02 19:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)
★ ★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-02 21:27:54
DNA看起来没问题，可以用。你将后面的两个DNA模板稀释50或100倍再PCR试试。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-11-02 19:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)
★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
加RNA酶消化了没？抽提一下试试，看基因组主带应该不会有问题。另外CTAB法提的基因组浓度比较大，可以做个稀释度。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-02 21:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +10 不会吃肉 2026-04-12 10/500 2026-04-12 22:51 by 零零二
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 调剂 +10 月@163.com 2026-04-11 10/500 2026-04-12 09:14 by zhouyuwinner
[考研] 化学工程调剂289 +44 yang婷 2026-04-07 50/2500 2026-04-12 02:36 by 秋豆菜芽
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 一志愿211，化学310分，本科重点双非，求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 材料调剂 +10 18815505510 2026-04-09 11/550 2026-04-09 17:07 by 544594351
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 362求调剂一志愿中国石油大学 +4 我要考大 2026-04-06 6/300 2026-04-06 14:11 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭