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汕头大学海洋科学接受调剂
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 绿色荧光的观察

看文献上有人说：菌体绿色荧光的观察可以直接在紫外灯下看到。
我想问一下各位：
1、紫外灯就是平时操作台上的紫外灯就可以吗？？还是说需要特定波长的紫外灯，比如480nm的？？
2、紫外灯照射30s的话应该对菌体没有什么特别的影响吧？照射背景选择黑色的吧？？
3、GFP标记的菌株如果在紫外灯下没有看到荧光的话，是不是就能肯定真的没有发荧光了啊？？
4、紫外灯下观察菌体发荧光的时候，需要在平板上培养多长的时间才能观察得到？？
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1楼 2011-10-31 16:26:12
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流！ 2011-10-31 18:26:21
yesucao(金币+2): 谢谢回复 2011-11-01 08:49:32
GFP可以用紫外激光看肯定没有问题，但是对活体细胞有杀伤。
菌体绿色荧光的观察可以直接在紫外灯下我没有做过，不清楚，要看看到荧光你还需要考虑光能不能进去，还有荧光能不能出来。
简单的办法就是直接试试，这个很容易做到。
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2楼2011-10-31 16:48:29
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yesucao(金币+18): 2 2011-11-01 08:50:02
wanhscn(金币-14): 楼主反馈：本来是发2个金币，扣14金币，总共发4个金币，谢谢理解！ 2011-11-01 08:56:11
wanhscn(金币+5): 鼓励专家应助回帖，谢谢！ 2011-11-01 08:59:34
引用回帖:
1楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-31 09:26:12:
看文献上有人说：菌体绿色荧光的观察可以直接在紫外灯下看到。
我想问一下各位：
1、紫外灯就是平时操作台上的紫外灯就可以吗？？还是说需要特定波长的紫外灯，比如480nm的？？
2、紫外灯照射30s的话应该对菌体 ...

480nm 是可见光，紫外灯激发的是395nm的那个激发峰
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不让吃就去死
3楼2011-10-31 17:39:03
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-01 09:04:35
菌体表达蛋白的话直接日光就能看见吧   为什么是在平板上观察  平板上能表达出蛋白吗
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hold住
4楼2011-10-31 18:58:27
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-31 18:58:27:
菌体表达蛋白的话直接日光就能看见吧   为什么是在平板上观察  平板上能表达出蛋白吗

,我需要看到绿色荧光啊，现在日光下   平板上的菌体看不到绿色的
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5楼2011-10-31 20:26:37
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiemin217 at 2011-10-31 16:48:29:
GFP可以用紫外激光看肯定没有问题，但是对活体细胞有杀伤。
菌体绿色荧光的观察可以直接在紫外灯下我没有做过，不清楚，要看看到荧光你还需要考虑光能不能进去，还有荧光能不能出来。
简单的办法就是直接试试， ...

这个实验我已经做过了，确实在操作上开紫外看不到绿色，这个下午刚查过了，需要滤光片还有其他的一些东西才行，
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6楼2011-10-31 20:29:51
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ymmno6

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-11-01 09:05:14
我在做荧光假单胞的时候用的波长是366nm， 一般可见很强的荧光，不建议长时间在紫外灯下照射，紫外线看不见，不代表没有，可能数量少，或是荧光比较弱，建议在荧光显微镜下观察，如果没有，也就没有了。一般培养十二个小时以上就可以看见荧光了。
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7楼2011-11-01 04:21:32
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xiemin217

木虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-02 12:04:21
引用回帖:
6楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-31 20:29:51:
这个实验我已经做过了，确实在操作上开紫外看不到绿色，这个下午刚查过了，需要滤光片还有其他的一些东西才行，

紫外看到的我记得是白光，你的激发波长不样呀，还要滤光片的。昨天忘说了。找了荧光显微镜不难呀。
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8楼2011-11-01 10:02:32
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-02 12:04:38
用荧光显微镜能观察到 还有你的菌直接用紫外的话不一定能看见，但是破碎后跑电泳的胶在紫外能看出绿色的一条带。
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9楼2011-11-02 08:15:58
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 丫头7976 at 2011-11-02 08:15:58:
用荧光显微镜能观察到 还有你的菌直接用紫外的话不一定能看见，但是破碎后跑电泳的胶在紫外能看出绿色的一条带。

请问你所说的破碎跑电泳指的是跑SDS-PAGE吗？？？我跑过一次，只是没转的条带有点模糊，转了的倒是挺清晰的，所以就没参照，准备在跑一次。
那我的胶经染色脱色后，还能在紫外下照射吗？？已经泡了好几天的？？
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10楼2011-11-02 08:53:17
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