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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 实验液相色谱遇到了问题，请大家帮忙！！！
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shushen_jian

金虫 (正式写手)

[求助] 实验液相色谱遇到了问题，请大家帮忙！！！

各位虫友好：
我做的实验是苯和苯酐合成蒽醌，反应式如下
分析条件如下：
      检测器：多波长紫外检测器
      色谱柱：反相C18
      流动相：甲醇：水=80：20，加柠檬酸调至PH=3
      分析波长：257nm（根据文献报道，不知是否正确？）
1.刚开始根据文献上的报道我是用1，4-二氧六环来溶解蒽醌和苯酐混合物的（其中蒽醌和苯酐都是纯的物质），但是发现不知为什么如果单是进溶剂1，4-二氧六环它本身也会出峰（见色谱图1），从而导致出峰很乱，为什么溶剂1，4-二氧六环会出峰呢？
2.后来我试着用甲醇来溶解纯的蒽醌（蒽醌称的是0.0025g用甲醇溶于25ml容量瓶中，浓度是0.1mg/ml），发现峰型很好（见色谱图2）；
3.然后我就用甲醇来溶解蒽醌和苯酐的混合物，混合物中苯酐和蒽醌的质量是称的都是0.0012g,然后用甲醇溶于25ml的容量瓶中，发现出的峰（见色谱图3），可以看到蒽醌的响应因子在140-150mA，苯酐的响应因子只有10-20mA，我想问的是苯酐和蒽醌的质量之比是1：1，而它们的峰面积之比是不是也应该是1：1？另外保留时间在2.439min的峰是不是就是苯酐呢？
4.色谱图4代表的是单进苯酐的峰，苯酐是在这个时间出峰吗？
5.另外流动相中水不加柠檬酸时，出来的峰型也差不多，我想问的是这里的柠檬酸主要有什么用？
希望大家畅所欲言给与帮助，在此先谢过了，谢谢大家！！！
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1楼2011-10-31 11:30:11
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liangjinhuan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+10): 2011-11-01 08:15:12
1.1，4-二氧六环出峰也是可能的。说明1，4-二氧六环或者其含有的杂质在该波长下是有吸收的。而且出的杂峰比较多。应该不适宜作为本方法的溶剂。
2.因为本身流动相中含有甲醇，而且甲醇在250nm以后的吸收很小。如果待测物质在甲醇中稳定的话，建议用甲醇来溶解，或者流动相能溶解的话用流动相来溶解。这样可以有效消除溶剂峰。
3.应该是蒽醌和苯酐在波长下的吸收系数不一样，也就是它们在该紫外波长257的响应值是不一样。具体可以取两种物质进行紫外扫描来判定。这个也是检测复合样品中普遍存在的现象。
4.在此条件下再进一针溶剂，如果不是溶剂峰的话。那就可以判定2.4min左右的峰是苯酐的色谱峰。
5.柠檬酸的作用，这个没做过这种化合物的不太好说，不过一般流动相调节PH的话，基本都是为了调节峰型或者相邻杂质的分离度，还有就是为了保持样品和色谱体系的稳定性。
希望以上回答能对你有一定得帮助。
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你不解决问题，你就会成为问题
5楼2011-10-31 14:03:08
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普通回帖

ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+5): 2011-11-01 08:13:55
1、应该再进一针甲醇，看看溶剂峰的位置。
2、峰面积与样品在该波长的相应值有关，因此，不一定是1：1.
3、二氧六环在该波长有吸收，也是可能的。
4、二氧六环做溶剂与流动相的匹配不如甲醇。
5、要考虑苯酐的稳定性。
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2楼2011-10-31 11:42:01
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shushen_jian

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltxin2009 at 2011-10-31 11:42:01:
1、应该再进一针甲醇，看看溶剂峰的位置。
2、峰面积与样品在该波长的相应值有关，因此，不一定是1：1.
3、二氧六环在该波长有吸收，也是可能的。
4、二氧六环做溶剂与流动相的匹配不如甲醇。
5、要考虑苯酐的 ...

甲醇我也进了一针的，结果是没有出峰，如果我想用内标法来测蒽醌的含量，内标物可以选什么物质呢？另外，如果用面积归一化法或外标法，需要注意什么？哪个准确更高点啊？
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3楼2011-10-31 13:44:39
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shushen_jian at 2011-10-31 13:44:39:
甲醇我也进了一针的，结果是没有出峰，如果我想用内标法来测蒽醌的含量，内标物可以选什么物质呢？另外，如果用面积归一化法或外标法，需要注意什么？哪个准确更高点啊？

内标只是消除进样误差，现在气相色谱有的用，液相已经很少用了，对于自动进样的仪器就更没有必要了。有条件的话用外标法，但是要有对照品。
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4楼2011-10-31 13:55:40
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tshcdm

金虫 (小有名气)
2个物质不一样响应是因为最大吸收波长不一样。
2.4的那个是苯酐。
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6楼2011-10-31 16:30:46
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gaoqiong

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫村支书

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+2): 2011-11-01 08:14:32
二氧六环的截止波长是220,按道理说不会有吸收，可能你的溶剂不干净。
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天下古今之庸人，皆以一惰字致败；天下古今之才人，皆以一傲字致败。
7楼2011-10-31 21:50:38
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AMCCOM2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+5): 2011-11-01 08:14:47
1. 1，4-二氧六环在257nm估计吸收是很大的，可以直接扫描看看吸收波长扫描图。从图谱1上看有那么多峰，可能1，4-二氧六环会和流动相反应，也有可能柱子本身就脏了。从谱图看，1，4-二氧六环就不适合作他们两的溶剂。
2。进样量之比为1:1，峰面积不一定就是1:1.因为在257nm两个目标物的吸收不一样，所以响应就会不一样。
3.图上那个是苯酐。
4.加柠檬酸的话，我觉得是为了调整流动相的极性，从而调整目标物在流动相与固定相之间的分配比，得到好的分离度吧。
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8楼2011-10-31 22:44:21
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浩月

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+5): 2011-11-01 08:14:56
1.兄弟的1，4-二氧六环纯度不行，和1，4-二氧六环的紫外吸收无关，流动相能容最好用流动相。
2.峰型好说明条件还行，可以在此基础上优化。
3.不同物质在不同波长有不同的摩尔吸光系数，参见紫外可见吸收。
4.确定保留时间，你进含有单一物质的样，用保留时间来确定
5.不知道兄弟这个柠檬酸有什么用，都没有个固定的浓度。我猜是当缓冲用
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早上不想起，晚上不想睡。
9楼2011-10-31 23:48:16
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带着帽子旅行

铜虫 (初入文坛)
会不会是你把流动相的速度调节的过快了导致未分离完全  所以出来的峰会比较混乱
柠檬酸应该是调节流动相极性的
建议你先清洗一下仪器，
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喜欢了就努力去做
10楼2011-11-15 20:31:19
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