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shushen_jian
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[求助]
实验液相色谱遇到了问题，请大家帮忙！！！
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各位虫友好： 我做的实验是苯和苯酐合成蒽醌，反应式如下 分析条件如下： 检测器：多波长紫外检测器 色谱柱：反相C18 流动相：甲醇：水=80：20，加柠檬酸调至PH=3 分析波长：257nm（根据文献报道，不知是否正确？） 1.刚开始根据文献上的报道我是用1，4-二氧六环来溶解蒽醌和苯酐混合物的（其中蒽醌和苯酐都是纯的物质），但是发现不知为什么如果单是进溶剂1，4-二氧六环它本身也会出峰（见色谱图1），从而导致出峰很乱，为什么溶剂1，4-二氧六环会出峰呢？ 2.后来我试着用甲醇来溶解纯的蒽醌（蒽醌称的是0.0025g用甲醇溶于25ml容量瓶中，浓度是0.1mg/ml），发现峰型很好（见色谱图2）； 3.然后我就用甲醇来溶解蒽醌和苯酐的混合物，混合物中苯酐和蒽醌的质量是称的都是0.0012g,然后用甲醇溶于25ml的容量瓶中，发现出的峰（见色谱图3），可以看到蒽醌的响应因子在140-150mA，苯酐的响应因子只有10-20mA，我想问的是苯酐和蒽醌的质量之比是1：1，而它们的峰面积之比是不是也应该是1：1？另外保留时间在2.439min的峰是不是就是苯酐呢？ 4.色谱图4代表的是单进苯酐的峰，苯酐是在这个时间出峰吗？ 5.另外流动相中水不加柠檬酸时，出来的峰型也差不多，我想问的是这里的柠檬酸主要有什么用？ 希望大家畅所欲言给与帮助，在此先谢过了，谢谢大家！！！      |
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【答案】应助回帖
shushen_jian(金币+10): 2011-11-01 08:15:12
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1.1，4-二氧六环出峰也是可能的。说明1，4-二氧六环或者其含有的杂质在该波长下是有吸收的。而且出的杂峰比较多。应该不适宜作为本方法的溶剂。 2.因为本身流动相中含有甲醇，而且甲醇在250nm以后的吸收很小。如果待测物质在甲醇中稳定的话，建议用甲醇来溶解，或者流动相能溶解的话用流动相来溶解。这样可以有效消除溶剂峰。 3.应该是蒽醌和苯酐在波长下的吸收系数不一样，也就是它们在该紫外波长257的响应值是不一样。具体可以取两种物质进行紫外扫描来判定。这个也是检测复合样品中普遍存在的现象。 4.在此条件下再进一针溶剂，如果不是溶剂峰的话。那就可以判定2.4min左右的峰是苯酐的色谱峰。 5.柠檬酸的作用，这个没做过这种化合物的不太好说，不过一般流动相调节PH的话，基本都是为了调节峰型或者相邻杂质的分离度，还有就是为了保持样品和色谱体系的稳定性。 希望以上回答能对你有一定得帮助。 |
5楼2011-10-31 14:03:08
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