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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 实验液相色谱遇到了问题，请大家帮忙！！！
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shushen_jian

金虫 (正式写手)

[求助] 实验液相色谱遇到了问题，请大家帮忙！！！

各位虫友好：
我做的实验是苯和苯酐合成蒽醌，反应式如下
分析条件如下：
      检测器：多波长紫外检测器
      色谱柱：反相C18
      流动相：甲醇：水=80：20，加柠檬酸调至PH=3
      分析波长：257nm（根据文献报道，不知是否正确？）
1.刚开始根据文献上的报道我是用1，4-二氧六环来溶解蒽醌和苯酐混合物的（其中蒽醌和苯酐都是纯的物质），但是发现不知为什么如果单是进溶剂1，4-二氧六环它本身也会出峰（见色谱图1），从而导致出峰很乱，为什么溶剂1，4-二氧六环会出峰呢？
2.后来我试着用甲醇来溶解纯的蒽醌（蒽醌称的是0.0025g用甲醇溶于25ml容量瓶中，浓度是0.1mg/ml），发现峰型很好（见色谱图2）；
3.然后我就用甲醇来溶解蒽醌和苯酐的混合物，混合物中苯酐和蒽醌的质量是称的都是0.0012g,然后用甲醇溶于25ml的容量瓶中，发现出的峰（见色谱图3），可以看到蒽醌的响应因子在140-150mA，苯酐的响应因子只有10-20mA，我想问的是苯酐和蒽醌的质量之比是1：1，而它们的峰面积之比是不是也应该是1：1？另外保留时间在2.439min的峰是不是就是苯酐呢？
4.色谱图4代表的是单进苯酐的峰，苯酐是在这个时间出峰吗？
5.另外流动相中水不加柠檬酸时，出来的峰型也差不多，我想问的是这里的柠檬酸主要有什么用？
希望大家畅所欲言给与帮助，在此先谢过了，谢谢大家！！！
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qinnan

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1楼2011-10-31 11:30:11
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shushen_jian at 2011-10-31 13:44:39:
甲醇我也进了一针的，结果是没有出峰，如果我想用内标法来测蒽醌的含量，内标物可以选什么物质呢？另外，如果用面积归一化法或外标法，需要注意什么？哪个准确更高点啊？

内标只是消除进样误差，现在气相色谱有的用，液相已经很少用了，对于自动进样的仪器就更没有必要了。有条件的话用外标法，但是要有对照品。
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4楼2011-10-31 13:55:40
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+5): 2011-11-01 08:13:55
1、应该再进一针甲醇，看看溶剂峰的位置。
2、峰面积与样品在该波长的相应值有关，因此，不一定是1：1.
3、二氧六环在该波长有吸收，也是可能的。
4、二氧六环做溶剂与流动相的匹配不如甲醇。
5、要考虑苯酐的稳定性。
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2楼2011-10-31 11:42:01
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shushen_jian

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltxin2009 at 2011-10-31 11:42:01:
1、应该再进一针甲醇，看看溶剂峰的位置。
2、峰面积与样品在该波长的相应值有关，因此，不一定是1：1.
3、二氧六环在该波长有吸收，也是可能的。
4、二氧六环做溶剂与流动相的匹配不如甲醇。
5、要考虑苯酐的 ...

甲醇我也进了一针的，结果是没有出峰，如果我想用内标法来测蒽醌的含量，内标物可以选什么物质呢？另外，如果用面积归一化法或外标法，需要注意什么？哪个准确更高点啊？
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3楼2011-10-31 13:44:39
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liangjinhuan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

shushen_jian(金币+10): 2011-11-01 08:15:12
1.1，4-二氧六环出峰也是可能的。说明1，4-二氧六环或者其含有的杂质在该波长下是有吸收的。而且出的杂峰比较多。应该不适宜作为本方法的溶剂。
2.因为本身流动相中含有甲醇，而且甲醇在250nm以后的吸收很小。如果待测物质在甲醇中稳定的话，建议用甲醇来溶解，或者流动相能溶解的话用流动相来溶解。这样可以有效消除溶剂峰。
3.应该是蒽醌和苯酐在波长下的吸收系数不一样，也就是它们在该紫外波长257的响应值是不一样。具体可以取两种物质进行紫外扫描来判定。这个也是检测复合样品中普遍存在的现象。
4.在此条件下再进一针溶剂，如果不是溶剂峰的话。那就可以判定2.4min左右的峰是苯酐的色谱峰。
5.柠檬酸的作用，这个没做过这种化合物的不太好说，不过一般流动相调节PH的话，基本都是为了调节峰型或者相邻杂质的分离度，还有就是为了保持样品和色谱体系的稳定性。
希望以上回答能对你有一定得帮助。
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你不解决问题，你就会成为问题
5楼2011-10-31 14:03:08
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