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PCR扩增去除终止密码子
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| 最近要构建一个重组质粒,在原有的重组质粒目的基因的C末端上面加上一段基因,所以首先要去除原来目的基因的终止子TAG,设计引物后直接拿重组质粒作为模板,扩增去除终止子的目的基因,但是怎么也扩增不到我的目的条带1.7kb,我的重组质粒有5.9kb左右,载体是pse380,非特异性条带为1.5kb以及2.7kb左右,后来酶切重组质粒,胶回收1.7kb得到目的基因,用这个作为模板来扩增,跑胶还是没有,在1.0kb左右很亮的条带,用的是50-60的温度梯度,大家帮帮忙,谢谢啊,如果还有疑问,我在写清楚点! |
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