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[求助]
PCR扩增去除终止密码子
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| 最近要构建一个重组质粒，在原有的重组质粒目的基因的C末端上面加上一段基因，所以首先要去除原来目的基因的终止子TAG，设计引物后直接拿重组质粒作为模板，扩增去除终止子的目的基因，但是怎么也扩增不到我的目的条带1.7kb，我的重组质粒有5.9kb左右，载体是pse380，非特异性条带为1.5kb以及2.7kb左右，后来酶切重组质粒，胶回收1.7kb得到目的基因，用这个作为模板来扩增，跑胶还是没有，在1.0kb左右很亮的条带，用的是50-60的温度梯度，大家帮帮忙，谢谢啊，如果还有疑问，我在写清楚点！ |
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