24小时热门版块排行榜    

查看: 1547  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

todouhy

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增去除终止密码子

最近要构建一个重组质粒,在原有的重组质粒目的基因的C末端上面加上一段基因,所以首先要去除原来目的基因的终止子TAG,设计引物后直接拿重组质粒作为模板,扩增去除终止子的目的基因,但是怎么也扩增不到我的目的条带1.7kb,我的重组质粒有5.9kb左右,载体是pse380,非特异性条带为1.5kb以及2.7kb左右,后来酶切重组质粒,胶回收1.7kb得到目的基因,用这个作为模板来扩增,跑胶还是没有,在1.0kb左右很亮的条带,用的是50-60的温度梯度,大家帮帮忙,谢谢啊,如果还有疑问,我在写清楚点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

同意楼上,引物问题,如果说从质粒上都扩增不下来目的片段,那这个引物是绝对有问题的。重新设计吧。
4楼2011-10-31 10:29:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

章信来

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

怎么会有非特异性扩增?要知道无论是用质粒还是特异性目的片段做模板PCR扩增,体系中也只有目的片段才可能作为模版啊!我怀疑非特异性片段的出现最可能的原因就是你的扩增引物有问题的:引物是不是和目的片段内部以及载体有非特异性结合区啊!解决办法一是检查下你的突变引物,二是提高退火温度看看!
2楼2011-10-30 20:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物特异性不太好吧,把反向引物尽可能加长些试试
3楼2011-10-31 00:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

原始质粒测序以后再拿来做模板。先确定你的目的基因在质粒上有。
5楼2011-10-31 11:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕,一志愿中国矿业大学,总分314,求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子!
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见