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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录高手进来~~
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沾欢欢

金虫 (正式写手)

啦啦啦

[求助] 反转录高手进来~~

我提的病毒RNA浓度大概是0.15 微克/微升,反转录用的酶是宝生的M-MLV反转录酶~反转录之后我直接取 1 微升cDNA进行PCR扩增(25微升体系),电泳显示的目标条带很亮,并且也没有引物二聚体.但是呢,我将cDNA稀释十倍以后再取1微升进行PCR扩增,结果全是引物二聚体,几乎看不见目标条带,这是为何?就稀释十倍居然有那么大的差别??
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1楼 2011-10-27 20:49:40
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沾欢欢 at 2011-11-04 09:23:55:
要做灵敏度试验的话,肯定得稀释cDNA的呀

同意。
合的一链就那么一点，如不稀释，要用来qPCR定量的时候完全不够用。

建议提取高浓度的total RNA，然后多用点来合一链以提高cDNA(模板)浓度。我是直接用3-4ug total RNA来合一链的。
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伟大航线....
9楼2011-11-04 09:35:27
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