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培养大肠杆菌提取质粒失败。。。
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我是个能有500个拷贝的质粒。。转到大肠杆菌中，培养浑浊（12小时）后提取，发现老是提取不出来，质粒的浓度很低。我是加了卡那霉素。。。卡那是这个月内按比例配的, 终浓度按质粒说明书上是30微克/毫升的量。我做PCR却能够检验我的菌中是转染了目的质粒的，就是提不出来，浓度低。 另外，我发现我培养的大肠杆菌，养时间久了，比如好几天，会在LB液体培养基中会产生絮状沉淀，这个正常吗。。 最后一个问题，我发现，我转化质粒的菌，有的菌要3天才能在LB固体涂有卡那抗生素的培养基上长出来，这个是真的吗。 您有什么建议没有，谢谢大家的帮助。。。感激不尽。。。 |
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zc10052157
新虫 (正式写手)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2011-10-18 11:01:04
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5, MicEPI+1): 高手，谢谢回复哦~~~ 2011-10-17 23:54:44
scelab(金币+5, MicEPI+1): 高手，谢谢回复哦~~~ 2011-10-17 23:54:44
| 这个质粒是复制型质粒吗？你提取质粒是通过试剂盒提的吗，还是手提的呢，若是手提，会不会试剂问题，或是你的操作问题呢，破壁的时候有没有完全啊等等。你培养的大肠杆菌时间久了，会不会产生菌膜了呢，所以产生絮状沉淀啊，虽然没见过普通的大肠杆菌能产生絮状（没有培养这么久过），但是某些革兰氏阴性菌株经常会产生菌膜的，不知道你的大肠是不是这个原因。虽然不知道卡那稳不稳定，但是像氨苄平板放置3天估计已经没用了，所以长出的菌株的可能都是假阳性，卡那抗性不是倒平板之前到的吗，怎么会涂在表面呢。是不是真的，你可以挑些菌株做菌落PCR验证下嘛？如果这个质粒有其他抗性，可以换着试试啊。 |
2楼2011-10-17 23:49:27
