24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

gytjyb

新虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 47.9
散金: 27
帖子: 75
在线: 55.2小时
虫号: 845528
注册: 2009-09-11
专业: 实验动物学

[求助] 培养大肠杆菌提取质粒失败。。。

我是个能有500个拷贝的质粒。。转到大肠杆菌中，培养浑浊（12小时）后提取，发现老是提取不出来，质粒的浓度很低。我是加了卡那霉素。。。卡那是这个月内按比例配的, 终浓度按质粒说明书上是30微克/毫升的量。我做PCR却能够检验我的菌中是转染了目的质粒的，就是提不出来，浓度低。
另外，我发现我培养的大肠杆菌，养时间久了，比如好几天，会在LB液体培养基中会产生絮状沉淀，这个正常吗。。
最后一个问题，我发现，我转化质粒的菌，有的菌要3天才能在LB固体涂有卡那抗生素的培养基上长出来，这个是真的吗。
您有什么建议没有，谢谢大家的帮助。。。感激不尽。。。

回复此楼

» 猜你喜欢

博士读完未来一定会好吗已经有28人回复
博士申请都是内定的吗？已经有4人回复
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？已经有3人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有12人回复
投稿精细化工已经有4人回复
高职单位投计算机相关的北核或SCI四区期刊推荐，求支招！已经有4人回复
导师想让我从独立一作变成了共一第一已经有9人回复
读博已经有4人回复
JMPT 期刊投稿流程已经有4人回复
心脉受损已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

【资料】分子生物学常见问题解答已经有30人回复
质粒导入大肠杆菌已经有9人回复
提取大肠杆菌质粒失败的原因已经有11人回复
【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？已经有13人回复
【求助/交流】提取大肠杆菌质粒时，所用的大肠杆菌菌液在4°C可以保存多长时间? 已经有9人回复
【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒已经有11人回复
【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌已经有11人回复
微生物学考研资料1(沈萍版同步）免币分享已经有67人回复

1楼2011-10-17 23:34:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

tengyi

银虫 (初入文坛)

MicEPI: 1
应助: 0 (幼儿园)
金币: 531.1
帖子: 29
在线: 28.1小时
虫号: 1333993
注册: 2011-06-29
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5, MicEPI+1): 高手，谢谢回复哦~~~ 2011-10-17 23:54:44

这个质粒是复制型质粒吗？你提取质粒是通过试剂盒提的吗，还是手提的呢，若是手提，会不会试剂问题，或是你的操作问题呢，破壁的时候有没有完全啊等等。你培养的大肠杆菌时间久了，会不会产生菌膜了呢，所以产生絮状沉淀啊，虽然没见过普通的大肠杆菌能产生絮状（没有培养这么久过），但是某些革兰氏阴性菌株经常会产生菌膜的，不知道你的大肠是不是这个原因。虽然不知道卡那稳不稳定，但是像氨苄平板放置3天估计已经没用了，所以长出的菌株的可能都是假阳性，卡那抗性不是倒平板之前到的吗，怎么会涂在表面呢。是不是真的，你可以挑些菌株做菌落PCR验证下嘛？如果这个质粒有其他抗性，可以换着试试啊。