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zlong2008

木虫 (正式写手)

[求助] 关于HPLC保留时间的问题

这几天一直在做hplc.但是每天的标准品保留时间都不一样,而且是越来越长。最短的和最长的能够相差将近20分钟,刚开始没有用柱温箱,今天用了,柱压明显降低,但是保留时间却比没有用柱温箱的时候延长了。流动相是一样的,进样量也是一样的,请问问题出在哪里啊。是不是色谱柱有问题了啊。
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在压力中前进
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shooseal

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有就是有没有柱残留,可以在检测后进空白样看看有无色谱峰
Never give up,never shirk
9楼2011-10-17 01:08:22
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


zlong2008(金币+1): 谢谢,你的意思是说柱子被污染了吗? 2011-10-15 15:26:56
qinhy(金币+1): 回帖奖励~ 2011-10-15 18:45:36
柱压在每一次都是一致的么?如果柱子不稳定,设一个梯度冲下柱子吧,最终冲洗比例是你流动相的比例,然后换上你的流动相。
2楼2011-10-15 14:57:56
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zlong2008

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yumulin at 2011-10-15 14:57:56:
柱压在每一次都是一致的么?如果柱子不稳定,设一个梯度冲下柱子吧,最终冲洗比例是你流动相的比例,然后换上你的流动相。

今天的柱压都很稳定的,我用的是梯度洗脱,并且每次用完后,都用最初的流动相比例冲柱子,每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。
在压力中前进
3楼2011-10-15 15:26:16
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-10-15 16:56:54
zlong2008(金币+1): 谢谢 2011-10-16 10:54:16
如果进样量、温度和其他参数都一样,而同一个样品的保留时间相差这么大,我觉得可能是色谱柱的问题,建议先等梯度跑标准品,调整流动相比例使得样品在10~20min之间出峰,然后重复进样5次,看看保留时间相差多少。如果还是很大的话,很可能是柱子的问题了,用异丙醇洗柱子吧,然后再试,要不换个柱子试试,也能找出来原因
4楼2011-10-15 16:43:15
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