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zlong2008

木虫 (正式写手)

[求助] 关于HPLC保留时间的问题

这几天一直在做hplc.但是每天的标准品保留时间都不一样,而且是越来越长。最短的和最长的能够相差将近20分钟,刚开始没有用柱温箱,今天用了,柱压明显降低,但是保留时间却比没有用柱温箱的时候延长了。流动相是一样的,进样量也是一样的,请问问题出在哪里啊。是不是色谱柱有问题了啊。
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


zlong2008(金币+1): 谢谢,你的意思是说柱子被污染了吗? 2011-10-15 15:26:56
qinhy(金币+1): 回帖奖励~ 2011-10-15 18:45:36
柱压在每一次都是一致的么?如果柱子不稳定,设一个梯度冲下柱子吧,最终冲洗比例是你流动相的比例,然后换上你的流动相。
2楼2011-10-15 14:57:56
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zlong2008

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yumulin at 2011-10-15 14:57:56:
柱压在每一次都是一致的么?如果柱子不稳定,设一个梯度冲下柱子吧,最终冲洗比例是你流动相的比例,然后换上你的流动相。

今天的柱压都很稳定的,我用的是梯度洗脱,并且每次用完后,都用最初的流动相比例冲柱子,每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。
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3楼2011-10-15 15:26:16
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-10-15 16:56:54
zlong2008(金币+1): 谢谢 2011-10-16 10:54:16
如果进样量、温度和其他参数都一样,而同一个样品的保留时间相差这么大,我觉得可能是色谱柱的问题,建议先等梯度跑标准品,调整流动相比例使得样品在10~20min之间出峰,然后重复进样5次,看看保留时间相差多少。如果还是很大的话,很可能是柱子的问题了,用异丙醇洗柱子吧,然后再试,要不换个柱子试试,也能找出来原因
4楼2011-10-15 16:43:15
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zlong2008

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by alexsz1985 at 2011-10-15 16:43:15:
如果进样量、温度和其他参数都一样,而同一个样品的保留时间相差这么大,我觉得可能是色谱柱的问题,建议先等梯度跑标准品,调整流动相比例使得样品在10~20min之间出峰,然后重复进样5次,看看保留时间相差多少。 ...

你好,今天的柱压又有问题了,昨天用保温箱柱压一直在100左右,而今天柱压却倒了150左右,难道真的是柱子有问题了啊,没有用柱温箱的时候柱压也是150左右。
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5楼2011-10-16 10:37:08
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢回帖! 2011-10-16 23:23:58
zlong2008(金币+1): 谢谢这几天突然一切正常了。 2011-10-19 16:55:36
难道不进样只用纯甲醇跑的时候柱压也不稳定?一般用纯甲醇跑柱压应该在90左右~如果是这样,我觉得不是色谱柱堵了就是HPLC中间的某个管路不通畅,先试试用异丙醇洗洗柱子吧
6楼2011-10-16 18:55:44
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 多谢指教! 2011-10-16 23:24:52
zlong2008(金币+1): 谢谢这几天突然一切正常了。 2011-10-19 16:55:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by zlong2008 at 2011-10-15 15:26:16:
今天的柱压都很稳定的,我用的是梯度洗脱,并且每次用完后,都用最初的流动相比例冲柱子,每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。

倒不是柱子污染的问题,因为保留时间每一针之间差别大,应该就是系统不稳定,那么柱子是一方面,另外,你的流动相体系,是否有混合的精准,在线混合泵是否运行良好
7楼2011-10-16 19:03:07
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shooseal

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

zlong2008(金币+1): 谢谢,这些问题以前没有考虑到 2011-10-19 16:57:02
首先一个是流动相的准确性,有些物质对流动相比例要求很高,所谓差之毫厘,谬以千里,而且你是梯度洗脱,不知道你有没有使用缓冲盐?(我以前做过厄贝沙坦的方法摸索,有一个缓冲盐配得差一点,时间就差得离谱)
其次系统是否存在漏液现象,有漏液的话,保留时间相差也会千奇百怪的,这个峰面积会有所体现(如果进样用样品浓度一致的话)
第三,柱压,你这个柱压差得太离谱了,Agilent的柱压一般都很稳定的,岛津的波动可能大点,但是相差50,肯定是有系统原因的绝对不是偶然因素。
第四就是柱效了,有没有观察柱效啊,柱效有没有波动?
Never give up,never shirk
8楼2011-10-17 01:06:19
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shooseal

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有就是有没有柱残留,可以在检测后进空白样看看有无色谱峰
Never give up,never shirk
9楼2011-10-17 01:08:22
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li_yeqing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

色谱柱选择不合适,对样品有强保留
呵呵
10楼2011-10-19 16:37:36
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