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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 关于HPLC保留时间的问题
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zlong2008

木虫 (正式写手)

[求助] 关于HPLC保留时间的问题

这几天一直在做hplc.但是每天的标准品保留时间都不一样，而且是越来越长。最短的和最长的能够相差将近20分钟，刚开始没有用柱温箱，今天用了，柱压明显降低，但是保留时间却比没有用柱温箱的时候延长了。流动相是一样的，进样量也是一样的，请问问题出在哪里啊。是不是色谱柱有问题了啊。
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在压力中前进
1楼 2011-10-15 14:20:54
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zlong2008(金币+1): 谢谢，你的意思是说柱子被污染了吗？ 2011-10-15 15:26:56
qinhy(金币+1): 回帖奖励~ 2011-10-15 18:45:36
柱压在每一次都是一致的么？如果柱子不稳定，设一个梯度冲下柱子吧，最终冲洗比例是你流动相的比例，然后换上你的流动相。
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2楼2011-10-15 14:57:56
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zlong2008

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yumulin at 2011-10-15 14:57:56:
柱压在每一次都是一致的么？如果柱子不稳定，设一个梯度冲下柱子吧，最终冲洗比例是你流动相的比例，然后换上你的流动相。

今天的柱压都很稳定的，我用的是梯度洗脱，并且每次用完后，都用最初的流动相比例冲柱子，每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。
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在压力中前进
3楼2011-10-15 15:26:16
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-10-15 16:56:54
zlong2008(金币+1): 谢谢 2011-10-16 10:54:16
如果进样量、温度和其他参数都一样，而同一个样品的保留时间相差这么大，我觉得可能是色谱柱的问题，建议先等梯度跑标准品，调整流动相比例使得样品在10～20min之间出峰，然后重复进样5次，看看保留时间相差多少。如果还是很大的话，很可能是柱子的问题了，用异丙醇洗柱子吧，然后再试，要不换个柱子试试，也能找出来原因
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4楼2011-10-15 16:43:15
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zlong2008

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by alexsz1985 at 2011-10-15 16:43:15:
如果进样量、温度和其他参数都一样，而同一个样品的保留时间相差这么大，我觉得可能是色谱柱的问题，建议先等梯度跑标准品，调整流动相比例使得样品在10～20min之间出峰，然后重复进样5次，看看保留时间相差多少。 ...

你好，今天的柱压又有问题了，昨天用保温箱柱压一直在１００左右，而今天柱压却倒了１５０左右，难道真的是柱子有问题了啊，没有用柱温箱的时候柱压也是１５０左右。
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在压力中前进
5楼2011-10-16 10:37:08
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-10-16 23:23:58
zlong2008(金币+1): 谢谢这几天突然一切正常了。 2011-10-19 16:55:36
难道不进样只用纯甲醇跑的时候柱压也不稳定？一般用纯甲醇跑柱压应该在90左右～如果是这样，我觉得不是色谱柱堵了就是HPLC中间的某个管路不通畅，先试试用异丙醇洗洗柱子吧
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6楼2011-10-16 18:55:44
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-10-16 23:24:52
zlong2008(金币+1): 谢谢这几天突然一切正常了。 2011-10-19 16:55:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by zlong2008 at 2011-10-15 15:26:16:
今天的柱压都很稳定的，我用的是梯度洗脱，并且每次用完后，都用最初的流动相比例冲柱子，每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。

倒不是柱子污染的问题，因为保留时间每一针之间差别大，应该就是系统不稳定，那么柱子是一方面，另外，你的流动相体系，是否有混合的精准，在线混合泵是否运行良好
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7楼2011-10-16 19:03:07
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shooseal

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

zlong2008(金币+1): 谢谢，这些问题以前没有考虑到 2011-10-19 16:57:02
首先一个是流动相的准确性，有些物质对流动相比例要求很高，所谓差之毫厘，谬以千里，而且你是梯度洗脱，不知道你有没有使用缓冲盐？（我以前做过厄贝沙坦的方法摸索，有一个缓冲盐配得差一点，时间就差得离谱）
其次系统是否存在漏液现象，有漏液的话，保留时间相差也会千奇百怪的，这个峰面积会有所体现（如果进样用样品浓度一致的话）
第三，柱压，你这个柱压差得太离谱了，Agilent的柱压一般都很稳定的，岛津的波动可能大点，但是相差50，肯定是有系统原因的绝对不是偶然因素。
第四就是柱效了，有没有观察柱效啊，柱效有没有波动？
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Never give up，never shirk
8楼2011-10-17 01:06:19
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shooseal

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有就是有没有柱残留，可以在检测后进空白样看看有无色谱峰
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Never give up，never shirk
9楼2011-10-17 01:08:22
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li_yeqing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

色谱柱选择不合适，对样品有强保留
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呵呵
10楼2011-10-19 16:37:36
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