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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于BamHI SalI 双酶切的问题
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小翠迪

木虫 (小有名气)

[求助] 求助：关于BamHI SalI 双酶切的问题

最近我在做双酶切鉴定重组质粒中的基因片段，酶切之后电泳。用37℃切1h的时候，电泳跑出的是4条带，除了目的条带中间还多出两条未知带；37℃切30min的时候，电泳跑出的是3条带，连目的条带都没有了……请各位高人帮忙分析原因啊！
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1楼 2011-10-10 23:06:28
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你有序列么？确定就那几个位点？
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-11 00:14:14
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没有切完全，1小时时只切了一小部分
0.5小时没切开
3条带是质粒原先固有的
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3楼2011-10-11 08:45:48
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pgf12500
4楼2011-10-11 09:04:15
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小翠迪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yang0071 at 2011-10-11 08:45:48:
没有切完全，1小时时只切了一小部分
0.5小时没切开
3条带是质粒原先固有的

1小时的最上面和最小的两个条带是目的条带，而且比较亮，应该是切开了啊。0.5小时的那张图里面有个是两条带的，那个是用的 SalI和HindⅢ 双酶切，切出来的很好，都是目的条带啊，说明质粒本身不会是3条啊
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5楼2011-10-11 09:56:14
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小翠迪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 00:14:14:
你有序列么？确定就那几个位点？

是，没有其他位点了
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6楼2011-10-11 10:10:52
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小翠迪 at 2011-10-11 10:10:52:
是，没有其他位点了

那就可能是30min的时候还没切开，提出来的质粒三条带很正常，那三条带是质粒固有是……1h后切开了
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7楼2011-10-11 10:25:44
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小翠迪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 10:25:44:
那就可能是30min的时候还没切开，提出来的质粒三条带很正常，那三条带是质粒固有是……1h后切开了

为什么是固有的，条带位置解释不通啊，质粒本身大小事11000，1h后切开了，那为什么中间还有两条呢？
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8楼2011-10-11 17:26:15
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1h后也没有完全切开吧
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显微镜下的世界很精彩！
9楼2011-10-11 19:37:36
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小翠迪 at 2011-10-11 09:56:14:
1小时的最上面和最小的两个条带是目的条带，而且比较亮，应该是切开了啊。0.5小时的那张图里面有个是两条带的，那个是用的 SalI和HindⅢ 双酶切，切出来的很好，都是目的条带啊，说明质粒本身不会是3条啊

这是一个数学问题，LZ可以计算一下 如果是部分酶切的放，酶切片段之间进行组合最多可能会有多少条带？最少呢？ 如果弄 清这 个问题，那你的问题也就解决了，呵呵
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小翠迪
10楼2011-10-11 19:46:00
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