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小翠迪

木虫 (小有名气)

[求助] 求助:关于BamHI SalI 双酶切的问题

最近我在做双酶切鉴定重组质粒中的基因片段,酶切之后电泳。用37℃切1h的时候,电泳跑出的是4条带,除了目的条带中间还多出两条未知带;37℃切30min的时候,电泳跑出的是3条带,连目的条带都没有了……请各位高人帮忙分析原因啊!



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小翠迪

木虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by yang0071 at 2011-10-11 08:45:48:
没有切完全,1小时时只切了一小部分
0.5小时没切开
3条带是质粒原先固有的

1小时的最上面和最小的两个条带是目的条带,而且比较亮,应该是切开了啊。0.5小时的那张图里面有个是两条带的,那个是用的 SalI和HindⅢ 双酶切,切出来的很好,都是目的条带啊,说明质粒本身不会是3条啊
5楼2011-10-11 09:56:14
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小翠迪

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 00:14:14:
你有序列么?确定就那几个位点?

是,没有其他位点了
6楼2011-10-11 10:10:52
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小翠迪

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 10:25:44:
那就可能是30min的时候还没切开,提出来的质粒三条带很正常,那三条带是质粒固有是……1h后切开了

为什么是固有的,条带位置解释不通啊,质粒本身大小事11000,1h后切开了,那为什么中间还有两条呢?
8楼2011-10-11 17:26:15
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小翠迪

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-11 19:46:00:
这是一个数学问题,LZ可以计算一下 如果是部分酶切的放,酶切片段之间进行组合最多可能会有多少条带?最少呢? 如果弄 清这 个问题,那你的问题也就解决了,呵呵

说的有道理,呵呵
12楼2011-10-11 22:45:09
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小翠迪

木虫 (小有名气)

嗯,可能确实有其他酶切位点,测序结果回头认真比对一下
15楼2011-11-06 09:45:58
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小翠迪

木虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by zd0017 at 2013-06-27 16:15:03
亲,你找到原因了吗,我也用这两种酶切的遇到同样问题?

可能有其他酶切位点吧,没找到具体原因,就把这个问题放下没再管了
17楼2013-06-28 17:50:24
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