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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
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erlangshen89

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-10-12 13:01:10
XhoI和KpnI是可以同一种Buffer的啊，你看

...

不同顺序酶切的话还用先回收再用另一个酶切还是直接再加入另一个酶？
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11楼2013-08-09 10:56:57
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xiangli2007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by erlangshen89 at 2013-08-09 10:56:29
不同顺序酶切的话还用先回收再用另一个酶切还是直接再加入另一个酶？

如果两个酶可以用相同的buffer，就第一个酶切三小时后直接加入第二个酶，刚刚用这种方法做出来了，也是紧挨着的位点
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12楼2014-01-26 07:48:23
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冰封之real

银虫 (初入文坛)
我以前试过，在没有保护碱基的情况下酶切几乎成功不了，所以如果两个酶切位点紧挨着的话，相当于切开一头另一头就没了保护碱基，恐怕不好切
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13楼2014-01-26 09:10:55
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易水情殇

捐助贵宾 (初入文坛)
一个酶把另一个酶切位点给切坏了

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think like a man, work like a boss
14楼2014-01-28 14:38:10
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