24小时热门版块排行榜    

查看: 577  |  回复: 2

btx362237729

金虫 (正式写手)

[交流] GST包涵体蛋白加入8M尿素1小时不溶。。在加入β-巯基乙醇貌似蛋白都没了 已有1人参与

GST的融合蛋白超声后检测上清没目的蛋白,于是知道都包涵体了

加入8M尿素,室温1小时,再次超声,结果蛋白还全在沉淀(离心是9000g 20min)

再次重悬沉淀加入含5mMβ-巯基乙醇的8M尿素buffer,再次超声,检测上清和沉淀。。。。发现都没蛋白了、、、、、

杯具了么。。。请问这是什么情况
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

人生最黑暗的时光终于过去了
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rhguo

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2218280楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-10-07 10:03:49:
GST的融合蛋白超声后检测上清没目的蛋白,于是知道都包涵体了

加入8M尿素,室温1小时,再次超声,结果蛋白还全在沉淀(离心是9000g 20min)

再次重悬沉淀加入含5mMβ-巯基乙醇的8M尿素buffer,再次超 ...

包涵体蛋白浓吧,加入8M尿素之后,要先重悬,冰水浴并置于70rpm摇床1H,再破碎,效果会好一些;不过你超声之后有电泳吗?为什么说全部在沉淀里面了呢?你加入5mM的巯基乙醇之后,也是蛋白放置在什么地方,距离你检测的时间有多长呢,如果是在常温,菌本身有蛋白酶会降解蛋白的
2楼2012-04-27 17:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4545814楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-27 17:14:49:
包涵体蛋白浓吧,加入8M尿素之后,要先重悬,冰水浴并置于70rpm摇床1H,再破碎,效果会好一些;不过你超声之后有电泳吗?为什么说全部在沉淀里面了呢?你加入5mM的巯基乙醇之后,也是蛋白放置在什么地方,距离你 ...

额。。。这个问题解决很长时间了、、、、、、、确实是放置时间的问题
人生最黑暗的时光终于过去了
3楼2012-04-27 19:11:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 btx362237729 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见