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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GST包涵体蛋白加入8M尿素1小时不溶。。在加入β-巯基乙醇貌似蛋白都没了
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btx362237729

金虫 (正式写手)

[交流] GST包涵体蛋白加入8M尿素1小时不溶。。在加入β-巯基乙醇貌似蛋白都没了 已有1人参与

GST的融合蛋白超声后检测上清没目的蛋白，于是知道都包涵体了

加入8M尿素，室温1小时，再次超声，结果蛋白还全在沉淀（离心是9000g 20min）

再次重悬沉淀加入含5mMβ-巯基乙醇的8M尿素buffer，再次超声，检测上清和沉淀。。。。发现都没蛋白了、、、、、

杯具了么。。。请问这是什么情况
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人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2011-10-07 10:03:49
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2218280楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-10-07 10:03:49:
GST的融合蛋白超声后检测上清没目的蛋白，于是知道都包涵体了

加入8M尿素，室温1小时，再次超声，结果蛋白还全在沉淀（离心是9000g 20min）

再次重悬沉淀加入含5mMβ-巯基乙醇的8M尿素buffer，再次超 ...

包涵体蛋白浓吧，加入8M尿素之后，要先重悬，冰水浴并置于70rpm摇床1H，再破碎，效果会好一些；不过你超声之后有电泳吗？为什么说全部在沉淀里面了呢？你加入5mM的巯基乙醇之后，也是蛋白放置在什么地方，距离你检测的时间有多长呢，如果是在常温，菌本身有蛋白酶会降解蛋白的
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2楼2012-04-27 17:14:49
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4545814楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-27 17:14:49:
包涵体蛋白浓吧，加入8M尿素之后，要先重悬，冰水浴并置于70rpm摇床1H，再破碎，效果会好一些；不过你超声之后有电泳吗？为什么说全部在沉淀里面了呢？你加入5mM的巯基乙醇之后，也是蛋白放置在什么地方，距离你 ...

额。。。这个问题解决很长时间了、、、、、、、确实是放置时间的问题
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人生最黑暗的时光终于过去了
3楼2012-04-27 19:11:53
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