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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » hplc非常诡异的问题-峰不见了
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)

[求助] hplc非常诡异的问题-峰不见了

柱子：C18（安捷伦），流动相：55%甲醇：45%（0.1%甲酸），甲酸水溶液ph为4左右，检测波长280，样品大致结构：黄酮葡萄糖醛酸苷
我昨天进了一针样品，在7.5min左右出来一个明显的峰，虽然前面有个小杂峰，但是主峰还是很明显的，但我后来又进了几次（洗脱浓度没变），发现峰没有了，用90%的甲醇冲到25min还是什么都没有，今早又来看看，发现6.5min出来一个小峰，但是不明显。
想问问大家，怎么会出现这样的怪事？样品分解了？没这么快啊~还是样品没打进去？
PS：我定量环20uL，今早我打了100uL的甲醇进去，发现排液口没有液体流出。。。又多试了几次，发现进10uL会有半滴流出。。。如果用注射器来洗进样阀，废液会流出来，我实在是搞不明白了。。。大家看看，我的峰为什么会消失

[ Last edited by muxiachuixue on 2011-9-20 at 11:38 ]
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以无法为有法，以无限为有限
1楼 2011-09-20 11:30:52
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yan1984

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西湖醉鱼(金币+2): 鼓励新人奖，欢迎常来 2011-09-20 19:46:18
muxiachuixue(金币+1): 六通阀都是新的，估计进样的时候进样针没顶紧 2011-09-20 21:56:45
很有可能是六通阀某个地方漏了。把螺丝拧紧可能有效果
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2楼2011-09-20 14:45:33
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

【答案】应助回帖

悬乎，盼正解！！！
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永远不要带着问题去找你的上司！
3楼2011-09-20 18:55:39
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wchao612

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

muxiachuixue(金币+1): 谢谢 2011-09-21 13:53:31
给你说几种可能，你得一一排除：
1 很有可能没进入检测池，堵了还是漏了？
2 矫正个波长看看，说不定就会有了
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4楼2011-09-21 09:45:12
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shyron

木虫 (正式写手)
可以逐步排除问题。
1：看看柱压力是否正常？确保色谱系统中流动相在走。如果流动相都没有了，肯定不会有峰，是吧。
2：如果1中都没有问题，可以进一个甲苯等物质，看是否出峰。排除是否样品分解？进样系统是否有问题？检测器是否有正常响应？如果出峰，液相系统没有问题，从样品上找原因吧。如果不出峰，从进样系统和检测器中找原因。
3：如何从进样系统和检测器中找原因？在基线平稳的流动相中加入有紫外吸收的物质，观察基线是否向上漂移。如果向上，检测器没有问题，反之检测器有问题。
4：如果检测器有问题，很可能是氘灯有问题。如果是进样系统的问题，肯定是样品进不到色谱系统中，可以拆卸检查。
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我虽然是小虫，但是拒绝为鸟服务！
5楼2011-09-21 12:59:02
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408851978

木虫 (著名写手)

道圣

【答案】应助回帖

muxiachuixue(金币+1): 第一次出来的应该是产品峰，峰形上能看出来 2011-09-21 13:53:10
你第一次出来的可能是鬼峰啊，建议进标准品试试
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奋斗是金！
6楼2011-09-21 13:21:22
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lschong

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

muxiachuixue(金币+1): 紫外是没问题的，估计先前没打进去，现在正常了 2011-09-21 13:52:00
你这个东西紫外吸收可能不太强，如果确定压力正常没有漏液什么的，可以把检测波长换成220nm试一下。
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傲雪寒梅
7楼2011-09-21 13:26:18
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shyron at 2011-09-21 12:59:02:
可以逐步排除问题。
1：看看柱压力是否正常？确保色谱系统中流动相在走。如果流动相都没有了，肯定不会有峰，是吧。
2：如果1中都没有问题，可以进一个甲苯等物质，看是否出峰。排除是否样品分解？进样系统是否 ...

可惜你没应助啊。给不了你金币了。我后来用较高浓度的样品试了下，发现峰出来了，可能一开始的浓度太小了，而且很有可能没打进去，谢谢啦
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以无法为有法，以无限为有限
8楼2011-09-21 13:51:26
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朝阳小狐狸

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

muxiachuixue(金币+1): 谢谢 2011-09-22 11:33:53
你这个问题，我用手动进样器的时候也遇到过，后来折腾了半天，发现一个很囧的原因，居然是我的进样针没有插到底，所以只有部分很少或者几乎没有样品进到定量环里。从来没有注意过这个问题，那几天疏忽了，迅速的打针，造成这个问题，所以每次都要把针卡紧了再往里推。
其他的复杂些的问题，发生率较低。
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9楼2011-09-22 11:00:47
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sdxuli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

会不会是进样器某个部位漏液了。我以前用的自动进样器出现过这种情况。
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10楼2011-09-22 11:20:23
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