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flyhbsa002新虫 (小有名气)
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[求助]
如何做同源重组
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本人初涉基因敲除，请教各位大侠！ 我要做丝状真菌基因敲除，可是这个基因序列未知（1200bp），我只扩到了五百多个bp的保守序列，也用TALE-PCR扩增了其侧翼序列了，但只扩到了850bp.想问问大家 ，可以用这850bp片段直接做敲除吗？同源臂有什么要求啊？ |
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 核酸方面 |
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【答案】应助回帖
flyhbsa002(金币+5): 嘿嘿！ 2011-09-14 09:25:00
| 之前阻断时可以不用扩增完整基因，但是你后续试验中要做遗传互补，以排除极性效应或自发突变的情况，以确保是基因被阻断后产生的影响，因此要做遗传互补，这时就需要把整个完整的基因给导回到基因阻断突变株中表达，以排除别的原因，所以，后面需要一个表达载体，所以完整的基因也是要扩的。 |
flyhbsa0026楼2011-09-14 09:14:52
2楼2011-09-10 21:01:08
flyhbsa002
新虫 (小有名气)
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3楼2011-09-10 21:12:23
4楼2011-09-11 11:07:55