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flylove037

新虫 (小有名气)

[求助] PCR高手请进,小女子有事相求,我刚来金币不要嫌少啊,我只有这么多啊,全给你了

最近做PCR很受伤,以前P出来的体系做了很多次,出结果的概率很低。中途PCR反应试剂用完了,重新订购的(takara),引物什么的也重新订购的,同样的序列同一个公司。然后重新优化PCR体系,结果如图:1、3、5、7、9是加了模板的,2、4、6、8、10没加,两两体系是一样的除了加模板和没加模板;所有试剂都一样,做了一个Mg离子梯度:2、3、4、5、6微升,原以为找到了原因,今天用6微升Mg离子的做了4批,一管都没有,桑心啊~~~哪位高人可以帮帮我啊,小女子不甚感激啊~~~~~
     试剂什么的应该没有问题的,因为其他同学做别的分子标记也做得出的。
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


wanhscn(金币+1): 鼓励回帖交流 2011-09-07 16:16:59
不行的话楼主就买那种预混的酶吧。比如tiangen公司的taq plus,所有成分都是预先混合在一起的,不用自己优化的。
我感觉现在PCR,跟试剂关系不大,现在的试剂质量那都是相当的好。关键要优化的就是退火温度,引物设计的有没有问题等。
生物资源交流QQ群:1044518333
12楼2011-09-07 15:10:56
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