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shuihaizi

金虫 (小有名气)

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[求助] pUC19-SalI单酶切，连个2500片段，连不上？

最近在做单酶切连接，怎么也连不上，请大家帮忙！
pUC19和2500bp的目的片段通过SalI单酶切，进行连接，不知道什么原因总是连不上？

本不应该难连啊？

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1楼 2011-09-05 21:45:00

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sunny_andy

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

1124162楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-06 16:43:23
使用的是TAKARA的Alkaline Phosphatase（CIAP）（Calf intestine），Code No.: D2250，
反应体系：
载体 20μL
10×Alkaline Phosphatase Buffer 5μL
CIAP 1μL
ddH20 23μL
37℃水浴30min后加入1μLCIAP， ...

使用的是TAKARA的Alkaline Phosphatase（CIAP）（Calf intestine），Code No.: D2250，
反应体系：
载体 20μL
10×Alkaline Phosphatase Buffer 5μL
CIAP 1μL
ddH20 23μL
37℃水浴30min后加入1μLCIAP，50℃水浴30min，最后回收纯化。可以使用TAKARA公司的DNA片段纯化试剂盒纯化，效果很好的。

请问你得回收纯化前不需要失活吗？为什么分开一个37度，一个50度？
着急，望回！