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linda1838

新虫 (初入文坛)

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[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳

现在在做聚丙烯酰胺电泳，胶浓度为15%，电压100v，电流30mA左右。运行后15min，loadingbuffer都不动，这是怎么回事？现在实验都不能进行了。
我确定我的loadingbuffer质量是没问题的。我觉得我可能是细节上出了问题，求高手指点！

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1楼 2011-09-05 09:19:55

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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

1楼: Originally posted by linda1838 at 2011-09-05 09:19:55:
现在在做聚丙烯酰胺电泳，胶浓度为15%，电压100v，电流30mA左右。运行后15min，loadingbuffer都不动，这是怎么回事？现在实验都不能进行了。
我确定我的loadingbuffer质量是没问题的。我觉得我可能是细节上出了问 ...

是不是胶浓度有问题。浓缩胶浓度一般为3%-5%，分离胶浓度根据待分离样品的情况选择适当的分离胶浓度，通常使用的15％的聚丙烯酰胺凝胶的分离范围是104～105，即分子量小于104的蛋白质可以不受孔径的阻碍而通过凝胶，而分子量大于105的蛋白质则难以通过凝胶孔径，这两种情况的蛋白质都不能得到分离。所以如果要分离较大的蛋白质，需要使用低浓度如10％或7.5%的凝胶（孔径较大）；而对于分离较小的蛋白质，使用的较高浓度凝胶（孔径较小）可以得到更好的分离效果。