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YJD落叶梧桐

新虫 (小有名气)

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[求助] 求从组织中提取DNA的方法已有2人参与

求从组织中提取DNA详细一点的步骤，谢谢了

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1楼 2011-08-31 20:31:14

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

1.取出析出液和洗涤液，按以下操作：
a) BIOG析出液：21mL加入9mL无水乙醇，混匀；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。
b) BIOG洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
2.取10-20mg左右的组织，用液氮研磨为粉末，转入1.5mL 离心管内，加入100 μL 生理盐水（或直接在100 μL 生理盐水中将组织匀浆为细胞悬液），振荡15秒；加入200 μL 裂解液， 20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。
3.加入20 μL 消化液B，充分混匀；56℃水浴60分钟至组织完全消化，5000rpm离心5分钟，将上清吸至1.5mL 离心管。
4.加入200μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
5.将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
6.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
7.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
9.取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-200 μL洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。