版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告

返回列表

jb1003

管理员

应助: 1 (幼儿园)
金币: 174.1
帖子: 26
在线: 15.8小时
虫号: 1202250

[交流] 药用植物麦冬ITS序列的扩增？

药用植物麦冬ITS序列的扩增，请高手指点一下，我扩了一两个月都没能稳定的扩出来。ITS序列的扩增引物分别为位于18S上ITS5(5-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3)和位于26S上的ITS4(5-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3)。PCR反应体系25μL总体积中，含有10×PCR buffer （上海生工）2.5μL；25mmol/L MgCl2 （上海生工）1.5μL；10 mmol/L dNTP mixture（上海生工） 0.5μL；10μmol/L引物各1.5μL；5 U/μL Taq DNA酶（上海生工）0.3μL；DNA模板3.0μL（约100ng）。扩增反应程序：95℃预变性4 min，95℃变性50 sec，50℃退火50 sec，72℃延伸90 sec，共35个循环，72℃延伸7 min，4℃保温。在那方面可能有问题呢？需做如何改进。谢谢。。凝胶电泳图见附件。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

药用乙醇有内毒素限量要求吗？已经有11人回复
不同类群植物叶绿素a/b含量的差异已经有8人回复
之前疏忽漏掉图片了，重新补上，请各位专家鉴定已经有24人回复
药用辅料标准及检测方法已经有3人回复
请教有关利用稳定同位素（C/N）技术进行植物学研究的发展现状及成果已经有8人回复
四川大学药用植物学课件资料已经有118人回复
中国药科大学中药学药用植物校园观察PPT 已经有69人回复
ITS序列扩增不稳定，什么问题呢？已经有3人回复
真菌ITS序列PCR扩增求助已经有9人回复
一种药用植物的化学成分和生物活性方面的综述往哪里投? 已经有6人回复
【分享】药用植物腊叶标本的制作已经有8人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-08-31 13:35:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

专家顾问

MolEPI: 3
应助: 0 (幼儿园)
金币: 988.2
帖子: 219
在线: 63.4小时
虫号: 1091730

★ ★ ★ ★
jb1003(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-08-31 17:06:25

我做的PCR反应体系是这样的，你可以参考一下：50μL反应体系
10×PCR Buffer 5μL
Mgcl2             3μL
dNTPs             4μL
10μmol/L引物各0.5μL
5U/μL rTaq       0.5μL
DNA模板    0.5μL
PCR扩增反应程序：
95℃预变性3min；
95℃变性1min；
55℃退火1min；
72℃延伸90s；30个循环；
72℃延伸8min，4℃保存。
根据你的反应体系来看，可能是DNA模板浓度太高，适当把模板浓度降低一点，我曾经也是这样，高浓度模板是P不出来的，后来稀释了50倍，电泳检测条带是很亮的。你可以试试看。另外，循环次数过多非特性会增多的，退火温度太低，非特异性也就多了。

赞一下(2人)