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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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madengyu

禁虫 (小有名气)

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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

小丹木木(金币+2): 鼓励交流 2012-02-27 17:40:09
本人做PCR较多,菌液PCR也不少,经常是一次性做一两百个的,而且是P长达11KB的片段,所以觉得做PCR还是有一定的运气,也就是指不稳定性。做菌液PCR最关键的如楼上所言:要做好阳性对照和阳性对照    这样就可以分析是反应体系还是反应条件的问题,而反应体系中最可能出问题的却是模板了,再者就是引物,为排除其它体系问题,对于新手可以用MIX反应液,现在很多公司都有卖,用起来方便,省去加样时出错;而反应条件里面最关键的就是退火温度了,至少菌液PCR,我习惯用较低一点儿的,50-55度,不过可根据自己的引物来定,其实总的来说,菌液PCR是非常容易扩增出来的。若基本排除所有可能的问题,找不到其它原因,可以再P一次,前提是你的阳性和阴性对照都是没问题的时候。第二次还没扩出来,那就是没有阳性克隆。欢迎交流!
13楼2011-09-01 20:42:08
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

直接将内容贴出来以便应助。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-29 19:47:49
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-29 19:47:49:
直接将内容贴出来以便应助。。。

我帮他编辑了
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
3楼2011-08-29 20:29:27
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liling77ll

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 楼主奖励 2011-08-30 07:58:40
跑菌液不需变性那么久的吧?还有保证菌液活的,感觉你菌液没加进去或者没活性,个人观点,呵呵
做最好的自己,和自己的昨天对比
4楼2011-08-29 21:16:47
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