8楼: Originally posted by sfb1020 at 2011-09-01 16:27:55:
我们实验室就用分子克隆的方法，没有问题的。你提的质粒做RNA酶消化了吗？酶消化后还要去除RNA酶，否则可能会对PCR和酶切有影响。

10楼: Originally posted by character at 2011-09-01 17:21:28:
pCAMBIA1301是低拷贝的载体 不太容易操作。提取质粒时一定要用氯仿把中酚抽干净 以免影响限制性内切酶和Taq酶的活性。

9楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-09-01 16:56:29:
1、查了一下，你这个载体很大诶，8000-10000kD吧。你用的marker太小了，可以换一下1K(最大为10000kD)的marker。
2、抽质粒跑胶图带的大小不是很准确，单酶切后大小就准确了。
3、你做了单酶切是什么结果啊，酶切 ...

13楼: Originally posted by rollandyoung at 2011-09-01 21:30:27:
感谢你的帮助
关于酶切我做了一下工作，请帮忙分析
一、内切酶：我用的是Xho 1，在pCAMBIA上有两个酶切位点，按照质粒图谱上的酶切位点，应该可以切下来大概1000bp的小片段。（质粒图谱如图所示）
二、反应体 ...

16楼: Originally posted by keyasyie at 2011-09-02 10:46:11:
你的酶切反应体系有问题，buffer和质粒加的都太多了 。按照内切酶的说明书重新设计下反应体系吧。