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rollandyoung金虫 (小有名气)
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[求助]
质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
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一、试验内容： 1. 质粒pCAMBIA1301DNA提取 2. 对提取的质粒DNA根据质粒图谱上的酶切位点进行验证性的酶切，所用酶Xho1。 3. 根据一篇已发表的论文所用的引物序列设计引物，进行验证性的PCR扩增。 二、主要试验材料：含有质粒的大肠杆菌（已经液体LB培养基摇菌16小时） 三、方法：参照分子克隆实验指南第三版 方案一 SDS碱裂解法制备质粒DNA：小量制备 四、结果：1.质粒DNA见电泳照片 2.酶切产物经电泳显示无酶切产物出现 3. PCR扩增无扩增产物出现 问题： 综合上述结果，使我对我提取的质粒DNA的质量产生了疑问，总结了以下问题 1. 我知道正常的质粒DNA电泳应该能够呈现出很亮且较宽的带型，这种情况属于正常吗？大家是否以前也遇到过这样的问题，是怎样解决的？ 2. 质粒DNA提取过程中有哪些需要注意的地方？ 3. 提取质粒DNA用到的试剂有特殊的要求和需要注意的地方吗？ 4. 除上述问题外还有哪些需要注意和改进的地方？ 已经被这个问题困扰了整个假期了，严重地影响了下一步的试验进程，故求助的心情十分之迫切，希望大家不吝赐教，在此先行谢过！  |
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西瓜: 鼓励新虫 2011-09-02 11:03:11
| 你的酶切反应体系有问题，buffer和质粒加的都太多了 。按照内切酶的说明书重新设计下反应体系吧。 |
16楼2011-09-02 10:46:11
空谷幽风
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【答案】应助回帖
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rollandyoung(金币+10): 感谢你的帮助，祝实验顺利！ 2011-08-29 16:25:01
西瓜(金币+1): 热心专家！ 2011-08-29 17:53:10
rollandyoung(金币+10): 感谢你的帮助，祝实验顺利！ 2011-08-29 16:25:01
西瓜(金币+1): 热心专家！ 2011-08-29 17:53:10
2楼2011-08-29 15:41:09
peace12039088
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3楼2011-08-29 16:55:33
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4楼2011-08-29 18:56:48
