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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

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lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): 感谢交流 2011-08-29 17:05:27
左旋安菲(金币+90): 谢谢我的镍柱是预装柱好像不透明我们用的fplc是GE公司的，好像也是AKTK的。不过我后来已经把这个柱子继续上样纯化蛋白了我回头再看一下吧 2011-08-31 01:51:03

镍柱是亲和层析，6个组氨酸标签，但是也不一定都没有杂带的，多多少少都会有，一步就到95%纯度极其艰难，这跟柱效关系不大。如果觉得不够纯，就用第一次纯化之后的蛋白质作为样品进行第二次纯化，会比第一次纯化之后更纯一些，但纯度能达到什么程度也是运气问题。

你的镍柱是预装柱？装填料的容器不是透明的？如果是透明的，填料进了气泡之后，填料之间的空隙会比没有空隙的地方白，一眼就看出来了。

因为你是在上样品的时候进空气，所以你应该用上样缓冲液来冲洗，最好别用20%乙醇，因为层析柱的溶剂更换有个原则，就是要确保溶剂之间不要起反应，所以进空气的时候溶剂能不换就最好不换，因为样品所处的起始液和20%乙醇是不同的。你用起始液冲洗10个柱床体积之后，空气应该就差不多跑掉了，可以正常洗脱了。

我用AKTA如果进了空气很容易处理，因为管道都是透明的，不知道FPLC的管道是不是透明的。FPLC说是流速更大，更耐压，其实层析的时候流速太大对蛋白质分离是极其不利的。

我用AKTA得出的结论，你权衡一下，合适就用，不合适就别用。