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请教盐酸胍助溶冻干蛋白干粉时,羟胺裂解后 ,跑电泳问题!!!!
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njunkai
新虫
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专业: 蛋白质组学
[
求助
]
请教盐酸胍助溶冻干蛋白干粉时,羟胺裂解后 ,跑电泳问题!!!!
近来做羟胺裂解,由于其冻干的蛋白干粉通过溶解液溶解时不完全,故加入盐酸胍助溶,裂解效率比较高,但是电泳时发现用SDS上样缓冲液处理样本,出现沉淀现象,煮沸后又可以溶解这沉淀,只是加到电泳槽后又形成沉淀了,跑电泳会比其他没有盐酸胍的电泳槽出跑得慢,一开始以为跑不下来,在80V跑后慢慢你又与其他的条带跑齐了。。。。真是纠结,不知道这样改怎么处理比较好,还在跑电泳,不知道结果怎么样就是了,不知道会不会影响????各位大侠帮忙出出主意呢。谢谢哈!!!!
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【求助/交流】请教蛋白冻干的问题
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1楼
2011-08-27 11:45:39
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木虫
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专业: 蛋白质组学
★
adslye(金币+1): 感谢交流~祝顺利! 2011-08-28 13:59:46
SDS与盐酸胍反应,产生不溶性的沉淀
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3楼
2011-08-27 19:03:29
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njunkai
新虫
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专业: 蛋白质组学
自己沙发,网各位同仁大虾们帮帮忙的呢。。。有劳了啊
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2楼
2011-08-27 11:46:11
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njunkai
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虫号: 1069519
注册: 2010-08-04
专业: 蛋白质组学
那这该怎么处理好呢,一方面是想通过加入盐酸胍提高羟胺裂解的效率,但这就是会影响电泳结果啊!!!
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4楼
2011-08-28 11:00:17
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云霆子
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
adslye(金币+3): 鼓励新虫虫应助~~常来哈~~ 2011-08-28 18:16:41
这个很简单,将样品煮沸后趁热上样,能够点入胶孔就可以,然后直接电泳,虽然的确会跑得很丑,但至少能够分辨。我们实验室用盐酸胍溶解包涵体然后电泳就是用的这样的方法。
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5楼
2011-08-28 15:29:37
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