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Ag6501

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白酶基因表达,用的Bacillus subtilis系统,但总是表达不出,求高人指点…… 已有11人参与

最近在用Mo Bi Tec的WB800N菌株和pHT43载体这个系统做蛋白酶基因的表达,基因序列全部正确,方法是:1、将转化过的菌株过夜培养,37度,220rpm;2、取菌液100微升转接入新培养基,37度,220rpm,培养至OD600为0.7-0.8之间,加入IPTG使终浓度为1mM;3、继续培养,并让转速降一些,37度,3h;4、检测蛋白酶的表达。
    但始终没有检测到蛋白产物,求各位高人指点,究竟是哪里出了问题,谢谢!

真愁,哎~~~~
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yyongl-168

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,能否提供一份WB800N菌株和pHT43载体给我?当然我们也可以互换的,我手头有下列质粒和菌株,
大肠杆菌表达系统:
质粒:pET3a,pET28a,pET30a,pET32a,pGEX-4T-1;菌株:BL21(DE3),Rostta
酵母表达系统:
质粒:pPIC9K,pYES2;菌株:GS115,INVSc1
乳酸菌表达系统:
质粒:pIL253,pLEM415,pJIM1715,pMG36e;菌株:MG136
酵母基因敲除系统:
质粒:pRS426,pCSN44;菌株:FY834
乳酸菌基因敲除系统:
质粒:pFED760,pJC159
植物表达质粒(GATEWAY系统):
质粒:pK2GW7,pKGWFS7,pENTR-2B
丝状真菌相关质粒:
基因定位质粒:pANGH3;基因敲除质粒:pPK2,pFG1,pMD18T-bar;启动子功能分析质粒:pSJ3,pSJ4
酵母双杂交系统:
质粒pGADT7,pGBKT7;菌株:AH109
如果可以交换,请联系我。QQ:39113616;email: yyongl-168@163.com
13楼2012-05-04 21:48:01
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