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Ag6501金虫 (正式写手)
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[交流]
蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点…… 已有11人参与
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最近在用Mo Bi Tec的WB800N菌株和pHT43载体这个系统做蛋白酶基因的表达，基因序列全部正确，方法是：1、将转化过的菌株过夜培养，37度，220rpm；2、取菌液100微升转接入新培养基，37度，220rpm，培养至OD600为0.7-0.8之间，加入IPTG使终浓度为1mM；3、继续培养，并让转速降一些，37度，3h；4、检测蛋白酶的表达。 但始终没有检测到蛋白产物，求各位高人指点，究竟是哪里出了问题，谢谢！ 真愁，哎~~~~ |
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yyongl-168
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楼主，能否提供一份WB800N菌株和pHT43载体给我？当然我们也可以互换的，我手头有下列质粒和菌株， 大肠杆菌表达系统： 质粒：pET3a，pET28a，pET30a，pET32a，pGEX－4T－1；菌株：BL21(DE3)，Rostta 酵母表达系统： 质粒：pPIC9K，pYES2；菌株：GS115，INVSc1 乳酸菌表达系统： 质粒：pIL253，pLEM415，pJIM1715，pMG36e；菌株：MG136 酵母基因敲除系统： 质粒：pRS426，pCSN44；菌株：FY834 乳酸菌基因敲除系统： 质粒：pFED760，pJC159 植物表达质粒（GATEWAY系统）： 质粒：pK2GW7，pKGWFS7，pENTR-2B 丝状真菌相关质粒： 基因定位质粒：pANGH3；基因敲除质粒：pPK2，pFG1，pMD18T-bar；启动子功能分析质粒：pSJ3，pSJ4 酵母双杂交系统: 质粒pGADT7，pGBKT7；菌株：AH109 如果可以交换，请联系我。QQ:39113616；email: yyongl-168@163.com |
13楼2012-05-04 21:48:01
xbl3688
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2楼2011-09-01 20:31:26
Ag6501
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3楼2011-09-08 17:22:08
speculiar
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4楼2011-11-08 10:25:45