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wanyiku

木虫 (正式写手)

[求助] RP-C18柱层析(反相填料柱层析)具体怎么样操作啊

硅胶柱层析后,我准备用反相填料柱层析脱色素,但不知道需要注意那些东西,求大侠帮助一下哈?
我的反相填料预处理是直接在纯甲醇里浸泡的,直接上柱吗?样品怎样上柱?甲醇-水系统,需要梯度洗脱吗?还有我们没有反相硅胶板,你们怎么样确定洗脱剂的比例,甲醇-水系统?
谢谢大家啦

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加油,你是最棒的
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yamisr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wanyiku(金币+1): 呵呵,谢谢回帖,谢谢指导 2011-08-26 15:59:29
引用回帖:
5楼: Originally posted by 葡萄小丸子 at 2011-08-25 11:00:55:
说到这个问题 我也有一个问题请教 我用反相硅胶时就用甲醇浸泡了下 就直接装柱上样了 结果冲下来很多白色的像脂肪一样的固体 但点板没有点 不知道你们有没有遇到过这种情况 是怎么回事呢?

这是填料没有冲干净
装柱的时候好好用纯甲醇多洗洗
众生度尽方证菩提,地狱未空誓不成佛……
9楼2011-08-25 18:59:58
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qrhuang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wanyiku(金币+2): 谢谢啦 2011-08-25 10:16:00
qinhy(金币+1): 谢谢~ 2011-08-25 18:22:30
应该可以直接上柱的,装柱应均匀压实了。柱装好后加样液,再加洗脱液。如果是多种色素,可用梯度洗脱,单一色素就不必了。洗脱液组成比例可以查查参考文献,再自己摸索一下。
2楼2011-08-25 10:14:30
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llhy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanyiku(金币+3): 太好了,谢谢啦 2011-08-25 10:43:52
jiangchunyong(金币+2): 谢谢 2011-08-25 11:10:42
可以直接将材料用甲醇浸泡后湿法装柱,装好后,反复用甲醇冲洗,平衡好后,在将柱内溶剂用水替代,当甲醇全部替代出来后,就可以上样了啊,也是湿法上样,样品使用尽量少得溶剂溶解,上好后,挂在柱上十来分钟,就可以用甲醇-水梯度洗脱了,如果无法确定极性,你可以从10%的甲醇-水开始梯度慢慢洗脱,不过这样比较耗时间啊
4楼2011-08-25 10:35:29
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葡萄小丸子

银虫 (小有名气)

说到这个问题 我也有一个问题请教 我用反相硅胶时就用甲醇浸泡了下 就直接装柱上样了 结果冲下来很多白色的像脂肪一样的固体 但点板没有点 不知道你们有没有遇到过这种情况 是怎么回事呢?
5楼2011-08-25 11:00:55
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