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wanyiku

木虫 (正式写手)

[求助] RP-C18柱层析（反相填料柱层析）具体怎么样操作啊

硅胶柱层析后，我准备用反相填料柱层析脱色素，但不知道需要注意那些东西，求大侠帮助一下哈？
我的反相填料预处理是直接在纯甲醇里浸泡的，直接上柱吗？样品怎样上柱？甲醇-水系统，需要梯度洗脱吗？还有我们没有反相硅胶板，你们怎么样确定洗脱剂的比例，甲醇-水系统？
谢谢大家啦

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加油，你是最棒的
1楼 2011-08-25 08:54:47
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llhy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanyiku(金币+3): 太好了，谢谢啦 2011-08-25 10:43:52
jiangchunyong(金币+2): 谢谢 2011-08-25 11:10:42
可以直接将材料用甲醇浸泡后湿法装柱，装好后，反复用甲醇冲洗，平衡好后，在将柱内溶剂用水替代，当甲醇全部替代出来后，就可以上样了啊，也是湿法上样，样品使用尽量少得溶剂溶解，上好后，挂在柱上十来分钟，就可以用甲醇-水梯度洗脱了，如果无法确定极性，你可以从10%的甲醇-水开始梯度慢慢洗脱，不过这样比较耗时间啊
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4楼2011-08-25 10:35:29
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qrhuang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanyiku(金币+2): 谢谢啦 2011-08-25 10:16:00
qinhy(金币+1): 谢谢~ 2011-08-25 18:22:30
应该可以直接上柱的，装柱应均匀压实了。柱装好后加样液，再加洗脱液。如果是多种色素，可用梯度洗脱，单一色素就不必了。洗脱液组成比例可以查查参考文献，再自己摸索一下。
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2楼2011-08-25 10:14:30
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葡萄小丸子

银虫 (小有名气)
说到这个问题 我也有一个问题请教 我用反相硅胶时就用甲醇浸泡了下 就直接装柱上样了 结果冲下来很多白色的像脂肪一样的固体 但点板没有点 不知道你们有没有遇到过这种情况 是怎么回事呢？
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5楼2011-08-25 11:00:55
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llhy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 葡萄小丸子 at 2011-08-25 11:00:55:
说到这个问题 我也有一个问题请教 我用反相硅胶时就用甲醇浸泡了下 就直接装柱上样了 结果冲下来很多白色的像脂肪一样的固体 但点板没有点 不知道你们有没有遇到过这种情况 是怎么回事呢？

我觉得可能是材料有点问题啊
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6楼2011-08-25 11:03:38
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