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friya0910

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[交流] 感受态细胞的制备已有1人参与

本人第一次制备感受态细胞，想请教各位大侠，第一次用0.1M的CaCl2悬浮菌体沉淀的时候大家一般都怎么操作的啊？我看到有说把移液枪调到500微升档，轻轻吹打，也有说不能用枪头吹打，要轻轻旋转，实在是不明白啊！我今天操作的时候是用的吹打，但都很温和，也用枪头轻轻旋转了！但是在冰上放置30min后准备离心的时候发现管底部还有一些沉淀，是不是我悬浮不够彻底啊？

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1楼 2011-08-24 13:19:04

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-24 19:34:42

我用的感受态就是我自己做的，很容易不用太刻意的吹打，有Cacl2的时候菌很容易就散了，管底有沉淀是不是你的菌数有些太大了。有没有测OD值呀。浓度太大了感受态成功率会低的

赞一下(2人)

2楼2011-08-24 13:42:15

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friya0910

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 铅钋锶钇 at 2011-08-24 13:42:15:
我用的感受态就是我自己做的，很容易不用太刻意的吹打，有Cacl2的时候菌很容易就散了，管底有沉淀是不是你的菌数有些太大了。有没有测OD值呀。浓度太大了感受态成功率会低的

1mL加入100mL培养基转摇，摇了3h，OD600是0.531，感觉第一次加CaCl2的时候菌不是很容易散开啊，我用的50mL的离心管装25mL的菌液。第二次比较容易散开。

[ Last edited by friya0910 on 2011-8-24 at 14:05 ]

3楼2011-08-24 14:03:31

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