| 查看: 941 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
sai00fuji金虫 (正式写手)
|
[求助]
用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
|
|
|
dscDNA的smear在500-3k，已经过柱分级纯化。kit使用的是in-fusion法克隆的，感受态自己制备，化学转。 目前做了实验组和阳性组，均是AMP抗性 实验组：dscDAN+pSMART载体 阳性组：PUC19+对照2k插入片段 都是按照protocol来的。 转化之后，在LB/AMP/IPTG/X-GAL平板培养14h，阳性组长满板，实验组一个都没有。 照现在的状况看，只可能是连接出问题。 会不会是dscDNA浓度太低的缘故，浓度低会一个菌都不长吗？ 要么是pSMART载体的问题？按说也不会啊 现在的想法是，1、用对照2k插入片段跟pSMART载体进行连接，检测pSMART载体的问题。2、用dscDNA去跟PUC19载体相连，检测dscDNA的问题。对此，我有个疑问，PUC19能否作为建库的载体？ 我是先做1比较好还是1和2一起做更好些？ [ Last edited by sai00fuji on 2011-8-20 at 12:05 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有56人回复
-
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有5人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助1段话的英译汉，是关于冠脉支架的-谢谢
已经有2人回复
- 液相梯度洗脱问题，愁人，求助
已经有18人回复
- 膜渗透装置求助~~
已经有27人回复
- 请问大家在低温下自由基共聚有没有什么有效提高转化率的方法啊~
已经有22人回复
- 求助：面包酵母或植物全细胞生物催化芳香酮这一方向，哪些期刊这方面做的比较多
已经有6人回复
- 【求助】请教各位用气相色谱分离脂肪酸的问题
已经有6人回复
- 求助吡啶-4-甲醛衍生物的合成
已经有5人回复
- ZSM-5合成被烧问题求助？
已经有9人回复
- 求助：BJH计算孔容和单点法计算孔容？
已经有7人回复
- 【求助】 HPLC流速跟峰高及峰面积的关系~~~
已经有10人回复
- 二氧化碳加氢制甲醇的二氧化碳转化率的测定
已经有6人回复
- 关于澳大利亚的可利用合作项目--紧急求助
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于建立cDNA文库的诸多问题，拜请解答
已经有11人回复
- 【求助/交流】BD SMART RACE cDNA Amplification kit 做5 RACE
已经有4人回复
- 【求助/交流】谁用SMART的cDNA文库构建试剂盒？？？
已经有6人回复
3楼2011-08-22 14:37:23
sai00fuji
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1049.4
- 散金: 673
- 红花: 3
- 帖子: 504
- 在线: 130.4小时
- 虫号: 470099
- 注册: 2007-11-29
- 专业: 生物化学
2楼2011-08-22 11:19:47
sai00fuji
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1049.4
- 散金: 673
- 红花: 3
- 帖子: 504
- 在线: 130.4小时
- 虫号: 470099
- 注册: 2007-11-29
- 专业: 生物化学
4楼2011-08-23 11:29:57