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sai00fuji金虫 (正式写手)
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[求助]
用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
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dscDNA的smear在500-3k，已经过柱分级纯化。kit使用的是in-fusion法克隆的，感受态自己制备，化学转。 目前做了实验组和阳性组，均是AMP抗性 实验组：dscDAN+pSMART载体 阳性组：PUC19+对照2k插入片段 都是按照protocol来的。 转化之后，在LB/AMP/IPTG/X-GAL平板培养14h，阳性组长满板，实验组一个都没有。 照现在的状况看，只可能是连接出问题。 会不会是dscDNA浓度太低的缘故，浓度低会一个菌都不长吗？ 要么是pSMART载体的问题？按说也不会啊 现在的想法是，1、用对照2k插入片段跟pSMART载体进行连接，检测pSMART载体的问题。2、用dscDNA去跟PUC19载体相连，检测dscDNA的问题。对此，我有个疑问，PUC19能否作为建库的载体？ 我是先做1比较好还是1和2一起做更好些？ [ Last edited by sai00fuji on 2011-8-20 at 12:05 ] |
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