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小星2011320

铁虫 (初入文坛)

[求助] 引物二聚现象

我引物合成了两管,先用了一管,另一管以干粉状态储存在-20度中,一个月之后新溶解引物,然后做PCR,好多都出现了引物二聚的现象,而且还很严重。提高退火温度也不行。第一次做的时候并没有出现引物二聚呀。这是怎么回事?求解!谢谢~
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖


看天(金币+1): 鼓励一下 2011-08-19 23:56:16
引用回帖:
1楼: Originally posted by 小星2011320 at 2011-08-19 20:30:55:
我引物合成了两管,先用了一管,另一管以干粉状态储存在-20度中,一个月之后新溶解引物,然后做PCR,好多都出现了引物二聚的现象,而且还很严重。提高退火温度也不行。第一次做的时候并没有出现引物二聚呀。这是怎 ...

想知道一下,你的PCR有没有做出来,如果你能跑出条带来,就不用管它了,还有你的引物有没有用软件分析一下二聚体形成情况啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2011-08-19 20:41:10
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-08-19 23:56:27
稀释就可以了,用量和第一次比减半。
很可能是这样,干粉运来的时候有很多附着在ep管盖上,融第一管的时候一个不小心就飞出去很多,而第二管冻存,时间久了就都跑在管底去了,造成实际浓度比第一管高。
How about the future?
3楼2011-08-19 21:29:44
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