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飞翔的诗人

银虫 (小有名气)

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虫号: 1215201
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专业: 生物技术药物

[求助] 引物及载体/宿主菌选择（用于酶表达）

本人查到的Alcaligenes faecalis DA1 D-氨基酰化酶序列只有CDS区，为了表达这种酶，设计引物是不是就没得选择，上游引物只能是从ATG开始的一段序列，下游引物就是终止密码前的一段序列了（用软件看这两段引物得分都很低，目的基因可能不好P）。相应地载体该如何选择，比如怎么判断载体上有没有合适的启动子，我打算就用实验室的PET 30a做表达，宿主菌就用BL21，这样选择有没有什么问题。下面附上了我查到的目的序列，
FEATURES          Location/Qualifiers
   source       1..1455
                  /organism="Alcaligenes faecalis"
                  /mol_type="genomic DNA"
                  /db_xref="taxon:511"
   CDS          1..1455
                  /EC_number="3.5.1.81"
                  /note="DaaAF"
                  /codon_start=1
                  /transl_table=11
                  /product="D-aminoacylase"
                  /protein_id="AAK15530.1"
                  /db_xref="GI:13194736"
                  /translation="MSQPDATPFDYILSGGTVIDGTNAPGRLADVGVRGDRIAAVGDLSASSARRRIDVAGKVVSPGFIDSHTHDDNYLLKHRDMTPKISQGVTTVVTGNCGISLAPLAHANPPAPLDLLDEGGSFRFARFSDYLEALRAAPPAVNAACMVGHSTLRAAVMPDLRREATADEIQAMQALADDALASGAIGISTGAFYPPAAHASTEEIIEVCRPLITHGGVYTHMRDEGEHIVQALEETFRIGRELDVPVVISHHKVMGKLNFGRSKETLALIEAAMASQDVSLDAYPYVAGSTMLKQDRVLLAGRTLITWCKPYPELSGRDLEEIAAERGKSKYDVVPELQPAGAIYFMMDEPDVQRILAFGPTMIGSDGLPHDERPHPRLWGTFPRVLGHYSRDLGLFPLETAVWKMTGLTAAKFGLAERGQVQPGYYADLVVFDPATVADSATFEHPTERAAGIHSVYVNGAAVWEDQSFTGQHAGRVLNRAGA"
ORIGIN
      1 atgtcccagc ccgacgccac cccgttcgac tacatacttt ccggcggcac cgtcatcgac
   61 ggcacgaacg cgccaggccg gctcgccgac gtgggcgtgc ggggcgatcg gattgccgcc
   121 gtcggcgacc tgagcgccag cagcgcccgc cggcgcatcg acgtggcggg aaaagtggtg
   181 tctccgggct tcatcgactc gcacacgcat gacgacaact acctgctgaa acaccgcgac
   241 atgacgccca agatctcgca gggcgtcacc accgtggtca cgggcaactg cggtatcagt
   301 ctcgccccgc tggcgcacgc caatccgccc gcgccgctgg atctgctgga cgaaggcggc
   361 tcgttccgct ttgcacgctt ctcggactac ctcgaagccc tgcgcgccgc gccgcctgcc
   421 gtcaacgccg cctgcatggt gggccattcc accctgcgcg ccgccgtcat gcccgacttg
   481 cggcgcgaag ccacggccga tgaaatccag gccatgcagg cgctggccga cgatgcgctg
   541 gccagtggcg ccatcggcat ttccacaggc gccttctatc cgcccgccgc ccatgccagc
   601 accgaggaaa tcatcgaagt ctgccgcccc ctgatcacgc atggcggcgt ctacgccacc
   661 catatgcgcg atgagggcga acatatcgtc caggcgctgg aggagacctt ccgcatcggc
   721 cgcgaactgg acgtgccggt cgttatctcg caccacaagg tcatgggcaa gctcaatttc
   781 gggcgctcca aggaaacgct ggccttgatc gaggcggcca tggccagcca ggacgtatcg
   841 ctggacgcct atccctacgt ggcgggctcc accatgctca agcaggaccg cgtcctgctt
   901 gccggccgca cgcttatcac ctggtgcaag ccctatcccg aactgagcgg acgcgacctg
   961 gaagaaatcg ccgccgagcg aggcaagtcc aagtacgacg tggtgcccga actgcagccc
   1021 gccggcgcca tctacttcat gatggacgag cccgacgtgc agcgcatcct ggcgttcggc
   1081 cccaccatga tcgggtccga tggcctgccc cacgacgagc gcccccaccc tcgcctgtgg
   1141 ggaacgtttc cccgggtgct gggccactac tcgcgcgacc tgggcctgtt cccattggag
   1201 accgcggtct ggaaaatgac cggcctgacc gccgccaaat tcggcctggc cgaacggggc
   1261 caggtgcagc ccggctacta cgccgacctg gtggtcttcg acccggccac ggtggcggac
   1321 tcggccacgt tcgagcatcc caccgagcgc gccgcgggca tccattcggt ctacgtcaac
   1381 ggcgcggccg tctgggaaga ccagtcgttc actggccagc atgccggccg cgtcctcaac
   1441 cgggccggag cctga

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