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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shuihaizi

金虫 (小有名气)


[交流] 做一个克隆所需的最短时间?比比谁更高效快速!

克隆一个基因:
第一天:小体系PCR(上午)-大体系回收(下午)-小样酶切-大体系酶切回收(包括载体)(晚上)-连接
第二天:早晨转化-晚上摇菌
第三天:PCR鉴定和提质粒酶切鉴定(上午提,下午鉴定
一切顺利的情况下,紧忙乎,有没有更快更更高效的体系啊?
求交流!
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yuxia82012

木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
一般三天吧,我克隆从来不酶切的,高保真酶扩增之后直接用Taq酶末端加A,连T载体,一小时后转化,第二天一般等到下午才挑单克隆摇菌,第三天快检提质粒酶切后测序
33楼2011-10-11 14:05:23
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cloverplm

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:33:51
哎,一般都是这个样子的啦,公司效率会高一点,因为有很多机器,很多Items可以同时做。
3楼2011-08-09 22:53:26
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wzqno

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:34:01
基本上最快也就这速度了,你可以用NEB的内切酶,一个小时搞定酶切,稍微快点
4楼2011-08-10 10:45:23
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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-10 12:12:02
shuihaizi(金币+1): 2011-08-10 16:34:40
原先在公司做的时候时间是这么安排的:
第一天:小体系PCR(上午)-大体系回收(下午)-小样酶切-大体系酶切回收(包括载体)(晚上)-连接转化
第二天:早上摇菌,1小时候菌落PCR验证,大概中午能出菌检结果,下午可以酶切验证或测序
fermentas的普通T4连接酶,我22℃连半个小时足够了,所以晚上连接转化可以一起做。
6楼2011-08-10 11:37:07
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