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[交流]
做一个克隆所需的最短时间？比比谁更高效快速！
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克隆一个基因： 第一天：小体系PCR（上午）-大体系回收（下午）-小样酶切-大体系酶切回收（包括载体）（晚上）-连接 第二天：早晨转化-晚上摇菌 第三天：PCR鉴定和提质粒酶切鉴定（上午提，下午鉴定） 一切顺利的情况下，紧忙乎，有没有更快更更高效的体系啊？ 求交流！ |
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 分子生化实验经验积累 |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): good 2011-08-16 11:52:27
shuihaizi(金币+2): 2011-08-23 16:18:42
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): good 2011-08-16 11:52:27
shuihaizi(金币+2): 2011-08-23 16:18:42
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另外IN FUSION，LIC等方法。连酶切连接一步都基本省掉了。更能节省时间。 看文献大规模高通量做构建的时候，均采用上述构建方法。 如果对PCR很有信心，是不是连切胶都可以省掉，直接过一遍PCR纯化柱。 另外现在的快速连接，5-10min搞定。、 最后质粒也不需要那么复杂，菌落PCR鉴定，甚至快检跑个电泳证明有插入基因。或者连鉴定都不鉴定（前提载体做得好）直接送测序，反正现在测序也便宜的很。 不过在学校的话，真是没有必要这么赶，认认真真老老实实，一步一步进行，做好对照，一次成功才是王道 |
23楼2011-08-15 17:08:18
3楼2011-08-09 22:53:26
4楼2011-08-10 10:45:23
6楼2011-08-10 11:37:07
