| 查看: 582 | 回复: 2 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
[交流]
一小段文献中方法的问题？？？有点没看明白
|
|||
|
本人新手，在一篇文献上学习一个蛋白的纯化步骤，这个蛋白用的是TEV-HIS TAG , 而且还有GST标签，我不大明白，为什么这么繁琐，只用HIS或者GST不行么？一下是这段的原文 The supernatant was loaded onto a glutathione sepharose column (GE Healthcare). After extensive washing with 20mM Tris buffer pH 8.0, 500mM NaCl, 1mM DTT, the GSTmoiety was cleaved by His-tagged TEV protease in the same wash buffer at 4°C overnight. The protein was passed through a Ni2+- NTA agarose column (Qiagen) to eliminate the His-tagged TEV protease, |
回复此楼» 猜你喜欢
刑法学论文投稿求助
已经有5人回复
-
大龄残疾硕士的一点执念
已经有8人回复
-
今年E04面上
已经有14人回复
-
Journal of Environmental Chemical Engineering
已经有3人回复
-
最后一年，祈求好运
已经有3人回复
-
风电环氧领域
已经有3人回复
-
2026年面上项目中了，2A+B, 会评顺利通过
已经有8人回复
-
昨日死，今日生
已经有8人回复
-
售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急
已经有4人回复
-
售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于参考文献中的一点问题
已经有1人回复
- 关于英文文献中巴西作者名字的姓和名的问题
已经有5人回复
- 重金悬赏：文献中的几段话翻译一下（译一段给一份）
已经有8人回复
- 文献中有句话不太明白！！望大家指点！~~多谢多谢啦
已经有3人回复
- 求助一文献中静电能的计算的问题
已经有4人回复
- 阅读英文文献中的问题
已经有5人回复
- 有关涂层文献中“etching” 一词的翻译问题。。。急！！
已经有15人回复
- 文献中一些问题不明白给通信作者写信不回
已经有6人回复
- 【求助】看文献中遇到一个问题，请教各位大虾!
已经有10人回复
- 【求助】关于这篇文献中SOC-OCV曲线的问题
已经有8人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
华中科技大学牛冉研究员课题组诚招硕士研究生、研究助理、博士研究生以及博士后
+1/77
-
在深圳的河南人，男找女
+1/71
-
工材学部会评时间知道么？
+1/65
-
澳门大学周胤宁课题组招收2027年8月入学博士生
+1/63
-
厦门大学张桥保教授团队招收2027年硕士/博士研究生以及博士后（材料、化学方向）
+1/44
-
中国科学院上海应用物理研究所物性研究组招聘
+2/38
-
《穿越持科研神辅，杀懵外星万舰》第一章 洞中醒来是异人
+1/34
-
沈阳农业大学招聘微生物酶工程方向博士！！！！！！！！！！！！！
+1/33
-
四川大学华西医院高瞻课题组诚聘博后、博士/硕士生及科研助理 （柔性医疗电子）
+1/32
-
吉林大学-电池物理教育部实验室-招收2027级-能源电池-博士研究生
+1/31
-
中山大学-中法核工程与技术学院-辐射探测与核电子学课题组招收研究生
+1/29
-
中山大学-中法核工程与技术学院-辐射探测与核电子学课题组招收研究生
+1/28
-
澳大利亚昆士兰大学（UQ）】全奖PhD招生：碳捕集与液流电池储能方向
+1/12
-
报名 | 上海交通大学浦江国际学院2026年暑期学术交流营活动通知 （7月12日截止）
+1/9
-
2氯5甲基吡啶和2氯6三氯甲基吡啶大生产工艺需求
+1/8
-
昆士兰大学陈鹏课题组博士招生（2027年入学）
+1/7
-
***超龄的未婚大叔希望能找到女结婚对象（沪深周围）
+2/6
-
圣路易斯华盛顿大学管建均教授课题组招聘博士后（2名）
+1/6
-
圣路易斯华盛顿大学管建均教授课题组招聘博士后（2名）
+1/6
-
中科院高能所博士生/联培生招生
+1/5
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, BioEPI+1): 2011-08-10 12:05:50
loveskyzhou(金币+2): 谢谢 2011-08-10 12:55:27
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, BioEPI+1): 2011-08-10 12:05:50
loveskyzhou(金币+2): 谢谢 2011-08-10 12:55:27
|
直译一下： 分装上清至谷胱甘肽收集柱(GE Healthcare)，用20mM Tris buffer pH 8.0, 500mM NaCl, 1mM DTT充分洗涤后，再用相同的buffer4℃浸泡过夜，部分GST被His-tagged TEV 蛋白酶剪切。随后该蛋白通过Ni2+- NTA 琼脂糖分离柱（Qiagen）去除His-tagged TEV 蛋白酶。 |
2楼2011-08-09 20:58:15
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+5): 解释地很清楚了，感谢交流！ 2011-08-29 09:53:30
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+5): 解释地很清楚了，感谢交流！ 2011-08-29 09:53:30
|
简单的说，（目的蛋白-GST）首先结合于glutathione sepharose column，然后通过加入His-tagged TEV protease （蛋白酶）切断目的蛋白和GST之间的连接肽，再加入buffer就可以把目的蛋白洗脱下来，柱子上则剩余结合的GST。 洗脱出的目的蛋白里面还有His-tagged TEV protease杂质，这部分通过Ni柱和His-tagged TEV protease特异性结合而去掉，最后溶液中就只有目的蛋白了。 这个方法是目前用的比较多的一种纯化方法，但通过这些亲和吸附之类的办法纯化蛋白质，最后都必须将诸如Histag、GST和CBD之类的标记tag去掉。蛋白酶方法是实验室里常用的一种。另外也有包括化学法（例如羟胺和溴化氢）、内含肽（intein）之类的等等其他手段。 |
3楼2011-08-10 15:27:51