| 查看: 660 | 回复: 2 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
[交流]
一小段文献中方法的问题？？？有点没看明白
|
|||
|
本人新手，在一篇文献上学习一个蛋白的纯化步骤，这个蛋白用的是TEV-HIS TAG , 而且还有GST标签，我不大明白，为什么这么繁琐，只用HIS或者GST不行么？一下是这段的原文 The supernatant was loaded onto a glutathione sepharose column (GE Healthcare). After extensive washing with 20mM Tris buffer pH 8.0, 500mM NaCl, 1mM DTT, the GSTmoiety was cleaved by His-tagged TEV protease in the same wash buffer at 4°C overnight. The protein was passed through a Ni2+- NTA agarose column (Qiagen) to eliminate the His-tagged TEV protease, |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于参考文献中的一点问题
已经有1人回复
- 关于英文文献中巴西作者名字的姓和名的问题
已经有5人回复
- 重金悬赏：文献中的几段话翻译一下（译一段给一份）
已经有8人回复
- 文献中有句话不太明白！！望大家指点！~~多谢多谢啦
已经有3人回复
- 求助一文献中静电能的计算的问题
已经有4人回复
- 阅读英文文献中的问题
已经有5人回复
- 有关涂层文献中“etching” 一词的翻译问题。。。急！！
已经有15人回复
- 文献中一些问题不明白给通信作者写信不回
已经有6人回复
- 【求助】看文献中遇到一个问题，请教各位大虾!
已经有10人回复
- 【求助】关于这篇文献中SOC-OCV曲线的问题
已经有8人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
项目结题验收，希望一切顺利
+1/968
-
大连理工大学大连市复杂工业场景具身智能重点实验室科研助理招聘启事
+2/174
-
急招科研助理/博士后
+2/164
-
招收 哈工大深圳﹣大湾区大学联合培养博士生1名，2027年入学
+1/94
-
美国肯塔基大学Dr. Sheng Tong博士后招聘（空间可控的基因组编辑与肿瘤免疫治疗）
+1/94
-
高校教师 科研教学岗
+1/80
-
来，到深技大读研究生！2027 期待与你 共创不凡!
+1/16
-
聚智生物材料，共赴学术新程，Biofunctional Materials青年编委开启全球招募！
+1/15
-
中国科大-合肥国家实验室冷原子量子网络团队招聘启事
+2/12
-
聚智生物材料，共赴学术新程｜Biofunctional Materials青年编委全球招募
+1/10
-
怀柔实验室与中国矿业大学（北京）氢能与燃料电池课题组招收2027年联培博士生
+1/6
-
中国石油大学（华东）生物质绿色化学转化和生物基功能高分子团队诚招27级推免生
+1/6
-
【生物材料与生物打印专题征稿】Scopus期刊，免APC
+1/4
-
关于征集高能质子与氦离子辐照实验用户需求的公告
+1/4
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/3
-
无人机方向 博士后与青年教师招聘公告
+1/3
-
浙江大学Kemal Celebi教授课题组招收2027年秋季博士生
+1/3
-
科研助理招聘 赣南师范大学先进封装前沿材料课题组
+1/2
-
口腔特刊客座招募客编Biofunctional Materials牙科生物功能材料专题，Scopus期刊
+1/2
-
哈尔滨工业大学（深圳）——大湾区大学博士，电机、电气方向，急招
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, BioEPI+1): 2011-08-10 12:05:50
loveskyzhou(金币+2): 谢谢 2011-08-10 12:55:27
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, BioEPI+1): 2011-08-10 12:05:50
loveskyzhou(金币+2): 谢谢 2011-08-10 12:55:27
|
直译一下： 分装上清至谷胱甘肽收集柱(GE Healthcare)，用20mM Tris buffer pH 8.0, 500mM NaCl, 1mM DTT充分洗涤后，再用相同的buffer4℃浸泡过夜，部分GST被His-tagged TEV 蛋白酶剪切。随后该蛋白通过Ni2+- NTA 琼脂糖分离柱（Qiagen）去除His-tagged TEV 蛋白酶。 |
2楼2011-08-09 20:58:15
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+5): 解释地很清楚了，感谢交流！ 2011-08-29 09:53:30
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+5): 解释地很清楚了，感谢交流！ 2011-08-29 09:53:30
|
简单的说，（目的蛋白-GST）首先结合于glutathione sepharose column，然后通过加入His-tagged TEV protease （蛋白酶）切断目的蛋白和GST之间的连接肽，再加入buffer就可以把目的蛋白洗脱下来，柱子上则剩余结合的GST。 洗脱出的目的蛋白里面还有His-tagged TEV protease杂质，这部分通过Ni柱和His-tagged TEV protease特异性结合而去掉，最后溶液中就只有目的蛋白了。 这个方法是目前用的比较多的一种纯化方法，但通过这些亲和吸附之类的办法纯化蛋白质，最后都必须将诸如Histag、GST和CBD之类的标记tag去掉。蛋白酶方法是实验室里常用的一种。另外也有包括化学法（例如羟胺和溴化氢）、内含肽（intein）之类的等等其他手段。 |
3楼2011-08-10 15:27:51
